Tesis - Licenciatura en Microbiología (Sin Restricción)
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Evaluación de la actividad proteolítica de bacterias aisladas de leche cruda, pasteurizada y procesada por tratamiento de ultra alta temperatura (UHT)(PUCE - Quito, 2023) Molina Morales, Erika Alexandra; Marcial Coba, Martín SebastiánPor su alto contenido nutricional, la leche bovina constituye un medio óptimo para el desarrollo de microorganismos contaminantes como bacterias psicrotróficas, mesófilas y termófilas. Aunque el tratamiento de ultra alta temperatura (UHT) puede inactivar la viabilidad de estas, algunas enzimas extracelulares, como las proteasas, son capaces de mantener su actividad. Estas, al ser capaces de degradar las micelas de caseína, provocan cambios organolépticos en el producto terminado (Guerrero et al., 2003). Con el propósito de determinar su potencial deteriorador, esta investigación evaluó la capacidad proteolítica de 33 cepas bacterianas aisladas de la cadena de producción de leche UHT. Para esto, se realizó un tamizaje de la capacidad proteolítica de las cepas, en pocillos perforados en placas de agar Plate count más 10% de leche descremada y se incubaron a 7°C durante 10 días, 30°C por 48 horas y 55°C durante 48 horas, en el caso de bacterias psicrotróficas, mesófilas y termófilas, respectivamente. Después de la incubación, se observó la formación de halos de digestión de caseína alrededor del inóculo y se determinó su diámetro. De un total de quince cepas psicrotróficas, doce presentaron capacidad proteolítica. El mismo fenómeno ocurrió con ocho de catorce y tres de cuatro aislamientos mesofílicos y termofílicos, respectivamente. El menor diámetro (1.0 cm) correspondió a Lacticaseibacillus paracasei P2.20, mientras que Bacillus licheniformis SDP.15 registró el mayor valor (3.3 cm). Sin embargo, no hubo una diferencia estadísticamente significativa entre las cepas de los tres grupos bacterianos. En cuanto a la evaluación de termorresistencia de las proteasas, solamente Pseudomonas lactis E6.10 fue la única cepa capaz de mantener su actividad enzimática tras el tratamiento térmico del sobrenadante libre de células a 92°C durante 8 minutos. Por otro lado, seis cepas psicrotróficas y tres termófilas inoculadas en leche descremada UHT, coagularon la caseína después de 7 días de incubación a 45°C. Este estudio, realizado por primera vez en Ecuador, constituye una herramienta para el desarrollo de futuras investigaciones relacionadas al potencial deteriorador de bacterias contaminantes de leche UHT.Item Open Access Evaluation of the activity of bispirazoles against recombinant Trypanosoma cruzi strains expressing ß-galactosidase(PUCE - Quito, 2023) Galarza Jarrín, Ambar Nicol; Costales Cordero, Jaime AlfredoBackground: Nifurtimox and benznidazole are the only drugs currently approved to treat Chagas disease, caused Trypanosoma cruzi. However, they display unsatisfactory efficacy and induce undesirable side effects. Therefore, identifying new compounds with specific activity against T. cruzi is of great interest. Methods. The in vitro activity of twenty-five bispirazoles was evaluated against intracellular amastigotes of the recombinant Tulahuen ß-gal strain of T. cruzi. Their cytotocicity against mammalian cells was evaluated via resazurin reduction assays. BNZ was used as a reference drug. Results: In the initial two repetitions of the screen, one bispirazole (2X) presented specific in vitro activity against T. cruzi, with an IC50 value of 3,416 µM and no measurable cytotoxicity at concentrations up 100 µM. BNZ, employed as reference drug, displayed a IC50 of 4,23 µM and a CC50 up to 100 µM. Compound 2X´s activity was not reproducible in subsequent replicates. Conclusions: One evaluated compound was selectively toxic against intracellular T. cruzi amastigotes in vitro and did not show cytotoxic activity against mammalian cells. Its IC50 value is comparable to those obtained for BNZ, the reference drug. Further studies are warranted to confirm the anti-T. cruzi activity of compound 2X.Item Open Access Susceptibilidad antimicrobiana de aislados bacterianos de Staphylococcus aureus provenientes de la Colección Bacteriana – Quito Católica (CB-QCA)(PUCE - Quito, 2023-06-23) Murillo Borja, Stephany Del Rosario; Yauri Bucheli, María FernandaStaphylococcus aureus es un coco Gram positivo que causa diferentes tipos de infecciones que circulan en centros hospitalarios y también en la comunidad. El presente estudio evaluó la susceptibilidad antibiótica de 18 aislados bacterianos de Staphylococcus aureus provenientes de la Colección Bacteriana – Quito Católica (CB-QCA). Se reactivaron los aislados y se utilizaron pruebas bioquímicas en la identificación de la especie de S. aureus mediante tinción Gram, pruebas de catalasa, coagulasa, oxidasa, DNAasa, ureasa y crecimiento en manitol salado. Para determinar el perfil de susceptibilidad antibiótica se empleó el método de difusión por disco Kirby-Bauer. A los aislamientos confirmados como S. aureus se identificó su perfil de susceptibilidad a los siguientes antibióticos: penicilina, eritromicina, gentamicina, cloranfenicol, ciprofloxacina, clindamicida, linezolid, tetraciclina, trimetoprimasulfametoxazol, rifampicina y cefoxitina. La evaluación de respuestas se llevó a cabo en la superficie de una placa de agar Mueller-Hinton donde una suspensión bacteriana fue sembrada en 3 planos rotando la placa 180°. Se colocaron cinco discos por placa utilizando una pinza estéril, en la superficie del agar y se incubó a 37 °C por 24 horas exactamente. Del total de aislados analizados de S. aureus el 100% (18/18) fue resistentes a penicilina, el 67% (12/18) fue resistente a cefoxitina, el 33% (6/18) a eritromicina y el 11% (2/18) a tetraciclina. Se observó sensibilidad a rifampicina, ciprofloxacina, trimetoprim-sulfametoxazole, linezolid del 100% (18/18). La sensibilidad a cloranfenicol, clindamicina y gentamicina mostró un 94% (17/18) de efectividad, por tanto, los aislados analizados podrían ser controlados mediante este tipo de antibióticos. El estudio enfatizó la importancia de la evaluación correcta de la susceptibilidad antibiótica. El análisis permitió establecer la dinámica de la resistencia en S. aureus. Esta información podría ser usada en la implementación de medidas rigurosas de prevención y control de la diseminación de la resistencia para reducir el riesgo de fracaso terapéutico en el tratamiento de infecciones.Item Open Access Efecto antimicrobiano de péptidos sintéticos obtenidos a partir de la piel de anuros ecuatorianos sobre bacterias multirresistentes(PUCE - Quito, 2023-06-16) Nuñez Santana, Camila Micaela; Costales Cordero, Jaime AlfredoLos antibióticos tradicionales están perdiendo efectividad frente a bacterias multirresistentes, las cuales se producen por el uso excesivo e inapropiado de agentes antibacterianos y por una selección natural de cepas bacterianas resistentes. Estas bacterias son cada vez más comunes y representan una amenaza para la salud mundial. El Sistema Mundial de Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos emitió un informe en 2018 que mostraba que las principales bacterias que presentan una mayor resistencia a los antimicrobianos son Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae y Mycobacterium tuberculosis. Esto ha planteado la necesidad de encontrar nuevas soluciones para combatir estas infecciones. En este estudio, se analizó la actividad de dos péptidos antimicrobianos frente a S. aureus resistente a la oxacilina (C-ORSA), E. coli productora de betalactamasas de espectro extendido (BLEE), K. pneumoniae portadora del gen KPC (K. pneumoniae carbapenemasa) y Serratia marcescens. Estos péptidos antimicrobianos son una alternativa innovadora para el tratamiento de infecciones causadas por bacterias multirresistentes. Los péptidos antimicrobianos son moléculas naturales o sintéticas que poseen una amplia actividad inhibitoria contra una gran variedad de microorganismos, incluyendo bacterias, virus, hongos y protozoos. Además, existe una baja probabilidad de que las bacterias desarrollen resistencia en comparación con los antibióticos tradicionales. El estudio utilizó la metodología de la Mínima Concentración Inhibitoria (MIC) y una prueba hemolítica. Se realizaron ensayos en placas de microdilución de 96 pocillos, con 10 diluciones de los péptidos, siendo 512 µg/ml la más alta y 1 µg/ml la más baja. Se realizaron 7 repeticiones por triplicado de cada ensayo para asegurar la repetitividad y la reproducibilidad de los resultados. Los hallazgos demostraron que los péptidos Dermaseptina sp7 y Dermaseptina sp10 exhibieron actividad inhibitoria frente a S. aureus (C-ORSA) y E. coli (BLEE), a concentraciones de 64 32 µg/m y 32 µg/m de MIC respectivamente, mientras que sobre K. pneumoniae y S. 10 marcescens no mostraron esta actividad. Estos péptidos no son citotóxicos para los eritrocitos. Estos resultados sugieren que la Dermaseptina SP7 y la Dermaseptina SP10 podrían ser una opción terapéutica prometedora para tratar infecciones causadas por bacterias S. aureus y E. coli multirresistentes.Item Open Access Caracterización morfológica de actinobacterias aisladas de una piscina de petróleo de la Amazonía ecuatoriana(PUCE - Quito, 2023-06-01) Gallo Caisapanta, Kevin Alejandro; Luna Unda, Cecilia Verónica; Jara Negrete, Eliza NuitLas actinobacterias pertenecen a un grupo de bacterias Gram positivas que se han logrado encontrar en una gran variedad de ecosistemas, incluyendo aquellos que muestran condiciones extremas. El objetivo principal de esta investigación fue lograr la identificación de especies de este filo en aislados provenientes de piscinas de petróleo de la Amazonía ecuatoriana a través de su descripción morfológicafisiológica y contrastación con la literatura especializada. Las características que se evaluaron fueron: forma, textura y color a nivel macro en diferentes medios de cultivo, forma a escala micro, uso de carbohidratos como única fuente de carbono, tolerancia a distintos niveles de pH, producción de pigmento melanoide. Se realizaron ensayos con 7 aislados, que al microscopio presentaron formación de filamentos, mientras que en medios sólidos desarrollaron colonias de forma circular e irregular, con bordes filamentosos, texturas arrugadas, lisas y polvorosas. Estas características se compararon con el Manual de Bergey y bibliografía sobre actinobacterias aisladas en ambientes contaminados por hidrocarburos. Con base en este análisis, se identificó a todos los aislados como pertenecientes al filo Actinomycetota, donde los géneros más probables fueron Rhodococcus, Streptomyces, Actinomadura y Actinomyces.Item Open Access Biocontrol de fitonematodos del género Meloidogyne utilizando saponinas en cultivos de piña (Ananas comosus) en el Ecuador(PUCE - Quito, 2023-06-16) Yánez Segovia, José Ignacio; Yánez Altuna, Jeniffer MarcelaUno de los principales productos de exportación de Ecuador es la piña, que genera ingresos netos de $37 millones en 2021, lo que le convierte en un cultivo de interés para el mercado ecuatoriano los fitonematodos del género Meloidogyne tienen un impacto en la industria de la piña, comúnmente conocidos como nematodos agalladores. Los agricultores se ven obligados a usar pesticidas tóxicos, lo que puede tener efectos negativos a largo plazo en la planta, los agricultores, los consumidores y el medio ambiente. Utilizar pesticidas diseñados específicamente para controlar la plaga en cuestión, como las saponinas, que tienen un espectro reducido, es crucial para reducir el impacto ambiental. El objetivo de este estudio fue evaluar la eficacia in vitro del té de saponina de Camellia japonica para combatir los nematodos en los cultivos de piña. Se llevaron a cabo experimentos de laboratorio para evaluar la actividad nematicida del té de saponina sobre los nematodos de la especie Meloidogyne, por medio de la evaluación de parámetros como la tasa mortalidad, tiempos de muerte y alteraciones morfológicas. Se evaluaron cinco dosis diferentes de té de saponina (60 mg/mL, 45 mg/mL, 30 mg/mL, 22,5 mg/mL y 15 mg/mL) con tres repeticiones para cada dosis. Los nematodos se expusieron a cada dosis y se realizaron observaciones periódicas hasta que mueran en su totalidad. Los resultados mostraron que el té de saponina de C. japonica afectó la viabilidad y la motilidad en comparación con los nematodos del grupo de control. En el análisis ANOVA se observaron diferencias significativas en los diferentes tiempos y con distintas dosis de té de saponina siendo la dosis alta (60 mg/mL) la que presentó acción nematicida total en un periodo de 61 minutos. adicionalmente, la dosis letal media (DL50) fue de 37 mg/mL, que eliminó al 50% de los nematodos en un período de una hora. Este estudio proporciona pruebas iniciales de la actividad nematicida del té de saponina de C. japonica sobre los nematodos en condiciones de laboratorio y da paso a investigaciones futuras para optimizar las dosis de saponina para las condiciones económicas de los productores de piña.Item Open Access Evaluación microbiológica de agentes causantes de biodeterioro en momias de Maranga del Centro Cultural-PUCE(PUCE - Quito, 2023-06-16) Luna Zapata, Melanie Alejandra; Santacruz Flores, Fernando RenéLa reserva del Museo Jacinto Jijón y Caamaño de la PUCE, alberga 46 ejemplares de Momias de Maranga. Estas momias muestran signos de deterioro que pueden deberse a factores ambientales o microbianos. Es por esto que es necesario realizar un análisis microbiológico para determinar si existen microorganismos en los cuerpos momificados y si son capaces de afectarlos por medio de su actividad enzimática. Se evaluó a dos momias, una con fardo funerario y otra expuesta. Se realizó un muestreo por impronta con cinco diferentes medios de cultivo. A partir de los aislamientos se realizó un tamizaje enzimático (amilolítico, celulolítico y proteolítico) relacionado al deterioro de los especímenes. Los aislamientos que exhibieron las capacidades enzimáticas evaluadas fueron caracterizados a nivel macroscópico, microscópico y molecular. Se identificó un total de 14 microorganismos con un índice enzimático significativo. Entre estos, los géneros Penicillium y Cladosporium destacan por tener una alta capacidad enzimática mientras que cada bacteria aislada fue significativa para una de las tres enzimas. Los hallazgos sugieren que los microorganismos encontrados son la causa del deterioro de las momias, especialmente aquella envuelta en fardo. Adicionalmente, constituyen una base para profundizar la investigación referente al deterioro microbiológico de restos históricos en el país.Item Open Access Evaluation of the in vitro anti-T.cruzi activity of four antimicrobial peptides from Ecuadorian anurans(PUCE - Quito, 2023-06-22) Ramos Dussling, Eloy Dylon; Costales Cordero, Jaime AlfredoBackground: Chagas disease (CD) caused by Trypanosoma cruzi, is considered the most important parasitic disease in the Americas. It is estimated to affect approximately 8 million people, 30% of which will develop the debilitating and potentially fatal health complications as a result. Infection by T. cruzi can be cured if treatment with benznidazole or nifurtimox is administered shortly after the infection occurs. However, treatment efficacy decreases over time, making treatment of chronic Chagas disease challenging. Additionally, these drugs frequently induce side effects. Antimicrobial peptides (AMPs), biologically active molecules produced by organisms through their innate immune system, are of considerable interest for developing new antimicrobial therapies. Methods. The anti-T. cruzi activity of four antimicrobial peptides derived from the gliding tree frog, Agalychnis spurrelli, was studied. Synthetic versions of adenoregulin- AS1 (ADN-AS1), dermatoxin-AS1 (DTX-AS1), dermaseptin-SP9 (DRS-SP9), and dermaseptin-SP10 (DRS-SP10) were tested in vitro against trypomastigotes of the recombinant Tula-ß-gal T. cruzi strain via colorimetric assays. The cytotoxicity of the peptides against mammalian cells was also evaluated, using rezasurin reduction assays. Results: The four studied peptides exhibited varying degrees of activity against T. cruzi tripomastigotes, the parasite forms infective to mammals, including humans. Three peptides (DTX-AS1, DRS-SP10, and ADN-AS1) displayed activity against the parasite (EC50 = 0,35, 1,21 and, 1,58 µM, respectively) with limited cytotoxic effects over mammalian host cells. DRS-SP9, conversely, displayed much lower (EC50 = 22, 91µM) activity. Conclusions: These findings suggest the studied peptides are active against T. cruzi trypomastigotes. Dermatoxina-AS1 (DTX-AS1) displays the most specific activity against the parasite. Although our data suggest peptides are lytic for the parasite, additional studies are required to clarify their mechanism of action.Item Open Access Aislamiento y detección molecular de las poblaciones del agente etiológico de la bacteriosis vascular (Xanthomonas phaseoli pv. manihotis) en yuca, en cultivos de la provincia de Sucumbíos, Ecuador(PUCE - Quito, 2023-06-16) López Zavala, Emily Alejandra; Yánez Altuna, Jeniffer MarcelaEl cultivo de yuca representa una importante fuente de alimentos e ingresos económicos en diversos países alrededor del mundo, no obstante, puede verse seriamente afectado por diversas enfermedades, entre ellas, se destaca el añublo bacteriano de la yuca o bacteriosis vascular de la yuca (CBB), que se considera como la enfermedad bacteriana más devastadora y problemática de la producción de yuca pues puede ocasionar pérdidas totales en las cosechas. El objetivo de este trabajo de investigación es aislar y detectar Xanthomonas phaseoli pv. manihotis, agente etiológico de la bacteriosis vascular, en muestras de yuca (Manihot esculenta) provenientes de la región de Sucumbíos, mediante técnicas de análisis molecular. El aislamiento y confirmación de Xanthomonas phaseoli pv. manihotis a partir de las muestras de yuca recolectadas se realizó mediante el cultivo selectivo en medio LPGA, la identificación molecular se llevó a cabo mediante PCR. Se identificó exitosamente la presencia de este patógeno en los cultivos de la Amazonía ecuatoriana por lo que este trabajo constituye el primer reporte de CBB en esta región ecuatoriana y tiende las bases para comenzar a entender la epidemiología y el impacto de la enfermedad, con el fin de establecer estrategias efectivas para prevenir y controlar la propagación del patógeno.Item Open Access Evaluación de la actividad antimicrobiana de péptidos sintéticos derivados de la piel de anfibios ecuatorianos(PUCE - Quito, 2023-06-01) Herrera Acurio, Francis Andrea; Costales Cordero, Jaime AlfredoLas infecciones causadas por microorganismos multirresistentes representan un grave problema de salud pública en todo el mundo. Entre las bacterias que producen estas infecciones se encuentran Staphylococcus aureus resistente a la oxacilina (C-ORSA), Escherichia coli productora de betalactamasas de espectro extendido (BLEE), Klebsiella pneumoniae productora de carbapenemasa (KPC) y Serratia marcescens. La resistencia de estas bacterias a los antibióticos existentes evidencia la necesidad de buscar nuevas alternativas de tratamiento. Los péptidos antimicrobianos (AMPs) son un conjunto de biomoléculas con alto potencial debido a sus mecanismos de acción contra bacterias. En este artículo se evaluó la efectividad de los péptidos Dermaseptina SP5 y SP9 derivados de la piel de Agalychnis spurrelli frente a aislados clínicos de las bacterias resistentes antes mencionadas. Se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria (MIC) de estos péptidos. Además, se realizó una prueba hemolítica para determinar el grado de hemólisis de cada uno de los péptidos. Los resultados mostraron que los péptidos no tuvieron efecto inhibitorio en S. aureus, K. pneumoniae y S. marcescens. Sin embargo, se observó un efecto inhibitorio en E. coli, con una dependencia de la concentración de los péptidos. Los resultados sugieren que la resistencia observada puede deberse a estrategias desarrolladas por las bacterias para evitar la actividad de los AMPs. También se evaluó el grado de hemólisis de Dermaseptina SP9, demostrando su capacidad para no dañar las membranas celulares. En general, se concluyó que las Dermaseptinas SP5 y SP9 tienen potencial como agentes antimicrobianos, pero se necesita más investigación para comprender sus mecanismos de acción y efectividad contra una amplia gama de bacterias resistentes.Item Restricted 
Evaluación de la capacidad de formación de biopelículas de bacterias psicrotróficas aisladas de leche cruda pasteurizada y UHT(PUCE - Quito, 2023-06-16) Mejía Flores, Génesis Daniela; Marcial Coba, Martín SebastiánLas bacterias psicrotróficas son un desafío común en la industria láctea debido a que, su presencia se ve favorecida por el uso extendido de refrigeración como método de conservación. Estas producen enzimas termorresistentes, lipasas y proteasas responsables del deterioro del producto final. El objetivo de este estudio fue analizar la capacidad, in vitro, de formación de biopelículas de bacterias psicrotróficas aisladas de leche cruda, pasteurizada y procesada por ultra alta temperatura (UHT). Se determinó, espectrofotométricamente, la capacidad formadora de biopelículas de quince cepas de bacterias psicrotróficas, luego de ser incubadas por 10 días a 7°C. Seguido, se evaluó la respuesta frente a la exposición a ozono (O3 230ppm) como agente inhibidor. La metodología utilizada fue similar a la anterior mencionada, con una única variación que incluyó la adición de O3. Además, se determinó la capacidad de formación de biopelículas en placas de acero inoxidable sumergidas en leche descremada. A partir de esto, se realizó un recuento de células planctónicas presentes en leche y células recuperadas de biopelículas desarrolladas en placas de acero. También, se evaluó la resistencia al calor de células planctónicas y células recuperadas de biopelículas. Los resultados, indicaron que ocho cepas fueron clasificadas como formadoras de biopelículas en placas de poliestireno. Entre estas Pseudomonas brenneri C10.34 presentó la mayor DO492nm (0.777), mientras que Pseudomonas grupo fragi C6.28 exhibió el menor valor (0.225). En contraste, el tratamiento con ozono, indicó que cinco cepas mantuvieron la capacidad de formar biopelículas, aunque únicamente Pseudomonas brenneri C10.34 (DO492nm 0.396) y Pseudomonas grupo fragi E11.31 (DO492nm 0.242) mostraron una reducción estadísticamente significativa. Adicionalmente, se encontró que, todas las cepas se propagaron de manera óptima en leche descremada, alcanzando una población de células planctónicas mayor a 107 UFC/mL. Asimismo, todas las cepas fueron capaces de formar biopelículas en placas de acero inoxidable con concentraciones superiores a 105 UFC/cm2. Por otra parte, la supervivencia de células planctónicas o de biopelículas fue variable entre las cepas, independientemente de la forma de vida en la que se desarrollen. Este estudio demuestra la variabilidad en la capacidad de formación de biopelículas de las distintas cepas y sugiere al ozono como un agente inhibidor.Item Open Access Identificación de los genes casette aacA4 y aadA1 asociados con la resistencia a aminoglucósidos en la familia enterobacteria(PUCE - Quito, 2022-12-01) Pavón Catani, Alexis David; Vela Peralta, Doris JimenaEl casete del gen aacA4 que codifica un aminoglucósido N (6')-acetiltransferasa se encuentra comúnmente en especies de Enterobacteriácea que portan un integrón de clase 1 que normalmente no contiene el gen aadA1 que codifica un aminoglucósido (3'‘) (9) adenoglucosiltransferasa. Este estudio tiene como objetivo investigar el potencial del gen aacA4 junto con el gen aadA1 para la resistencia a los aminoglucósidos en Enterobacteriácea. Los patógenos utilizados en este estudio se obtuvieron de múltiples bases de datos genómicas con énfasis en aquellos de relevancia clínica para humanos, incluidos Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Citrobacter freundii, Enterobacter Salmonella, Shigella spp. Los resultados muestran que la presencia de aacA4 solo confiere cierta resistencia a los aminoglucósidos; Sin embargo, la presencia del integrón aacA4 y el gen aadA1 resultó en un incremento el espectro de resistencia a los aminoglucósidos. El objetivo de este estudio fue establecer una relación entre estos dos genes y su prevalencia en Enterobacteriácea, lo cual es importante para comprender la resistencia a los antibióticos. Los resultados de este estudio mostraron que el integrón aacA4 y el gen aadA1 estaban ausentes en los genomas de las cepas sensibles a los aminoglucósidos. Por tanto, la presencia de estos dos genes puede considerarse como un marcador de resistencia múltiple en Enterobacteriácea. La detección temprana de patógenos multirresistentes es fundamental para el tratamiento eficaz de enfermedades infecciosas. Por lo tanto, nuestro estudio destaca la importancia de la detección de integrones aacA4 y genes aadA1 de Enterobacteriácea; esto puede mejorar el diagnóstico y tratamiento de infecciones causadas por estas bacterias.Item Open Access Evaluación del potencial micorremediador de siete cepas de hongos de los géneros Ganoderma, Leiotrametes y Rigidoporus mediante la determinación de su actividad enzimática(PUCE - Quito, 2023-06-01) Molina Espinoza, Byron David; Cipriani Ávila, Eva IsabelLos hidrocarburos totales de petróleo (TPHs) son contaminantes que provienen de actividades como la exploración y refinación de petróleo, derrames, fugas y emisiones industriales. Estos compuestos tienen baja densidad y capacidad de emulsificación, lo que los convierte en contaminantes persistentes en aguas y suelos, afectando a la flora, la fauna y al ser humano. En Ecuador, la presencia de TPHs en suelos y fuentes naturales de agua, especialmente en la región amazónica, generó graves consecuencias ambientales y afectó a las comunidades indígenas que dependían de estos recursos. La micorremediación por hongos de la pudrición blanca surgió como una alternativa innovadora para este problema, debido a que estos hongos cuentan con enzimas capaces de degradar eficazmente los TPHs y otros compuestos contaminantes. Esta estrategia respetuosa con el medio ambiente ofrece ventajas para la biorremediación y tiene un gran potencial en la eliminación de compuestos tóxicos y persistentes en el medio ambiente. En el presente estudio se tuvo como objetivo evaluar el potencial micorremediador de siete cepas de hongos de los géneros Ganoderma, Leiotrametes y Rigidoporus mediante la aplicación de pruebas de cribado rápido y determinación de lacasa (lac) por espectroscopia visible, cuatro de ellas cualitativas y una cuantitativa. Se utilizaron diferentes métodos para determinar la producción de la enzima lacasa (lac), peroxidasas (per) y otras enzimas ligninolíticas en hongos, estas se evaluaron mediante pruebas de RBBR, ácido gálico y el guaiacol, lo que produjo un cambio de color o decoloración en el medio de cultivo. También se determinó el porcentaje de inhibición de crecimiento miceliar frente a TPHs mediante su exposición en un medio de cultivo. Además, se evaluó la producción de lac mediante la técnica de espectrofotometría UVvisible. El análisis estadístico de los datos se realizó utilizando la correlación de Spearman con las variables obtenidas. Dos cepas de hongos mostraron alta actividad enzimática de lacasa, respaldando su potencial para degradar TPHs. Sin embargo, una cepa que exhibió actividad ligninolitica, no fue específica para los ensayos de lacasa y peroxidasa, a pesar de exhibir actividad ligninolítica. El análisis estadístico no mostró correlación lineal, destacando la importancia de investigaciones adicionales para comprender el potencial micorremediador de los hongos analizados.Item Open Access Evaluación de distintos residuos agroindustriales utilizados como fuente de carbono para la producción de goma xantana por Xanthomonas campestris pv. citri(PUCE - Quito, 2023-06-16) Vega Yánez, Francisco Emilio; Estrella Vásquez, Sonia MargaritaLa agroindustria genera cantidades considerables de residuos que muchas veces no son tratados de forma adecuada y pueden generar problemas ambientales en el futuro. Debido a su composición, los residuos agroindustriales pueden ser aprovechados como sustratos para la producción de metabolitos microbianos. En Ecuador, hay una limitada cantidad de estudios que proponen un uso alternativo para estos desechos. En este contexto, el presente trabajo se enfoca en la producción de goma xantana o también llamado xantano, un heteropolisacárido producido por la bacteria Xanthomonas campestris, que tiene una amplia gama de aplicaciones en las industrias alimentaria, cosmética, agrícola y petrolera. Para la producción de goma xantana, se utilizaron dos desechos agroindustriales como fuentes alternativas de carbono: la melaza, un jarabe residual de la cristalización del azúcar, y la vinaza, un subproducto resultante de los procesos de destilación alcohólica. Además, se emplearon dos cepas diferentes de Xanthomonas campestris, una aislada de una planta de col y la otra de una planta de coliflor. Los resultados obtenidos indican que el medio basado en melaza presenta una mayor eficiencia en la producción de goma xantana en comparación con el medio basado en vinaza. También se observaron diferencias en ciertas características reológicas de la goma producida entre ambos medios. En cuanto a las diferentes cepas utilizadas, no se pudo determinar una diferencia significativa en la producción de xantano entre ellas.Item Open Access Antagonismo de bacterias aisladas de la Cueva de los Tayos frente a bacterias entéricas multirresistentes(PUCE - Quito, 2023-06-16) Pozo Gancino, Jerram Steve; Alcocer Negrete, Iliana Del RocíoLas bacterias entéricas resistentes a antimicrobianos representan uno de los mayores problemas de salud a nivel mundial, por ello se ha planteado a los mecanismos antagónicos de bacterias provenientes de cuevas como una posible solución a la creciente aparición de especies entéricas multirresistentes. Por lo anteriormente mencionado, en este estudio, se evaluó la potencial actividad antagónica de cepas bacterianas aisladas de la Cueva de los Tayos frente a bacterias entéricas, como posible solución a la creciente aparición de especies multirresistentes. Se utilizaron pruebas bioquímicas y espectrometría de masas MALDI-TOF para revelar la identidad de las bacterias utilizadas en el estudio. Se emplearon métodos de difusión de disco e inactivación de disco para comprobar la resistencia y sensibilidad de bacterias entéricas. La evaluación de respuestas antagónicas se llevó a cabo mediante métodos de difusión en agar, donde se inocularon 100 µl de suspensiones bacterianas de la Cueva de los Tayos en pocillos formados en el medio sólido, donde se sembraron las bacterias entéricas, se contó con 4 repeticiones para evaluar la respuesta antagónica sobre cada bacteria entérica y se tomó como variable de respuesta a los halos de inhibición observados a las 72 horas de la incubación. Se identificaron 6 bacterias de la Cueva de los Tayos: Bacillus pumilus, Bacillus lincheniformis, Lisinibacillus xylaniticus, Proteus mirabilis, Acinetobacter vivianii y Brevibacillus parabrevis. Se comprobó la resistencia a antimicrobianos de Escherichia coli BLEE 4156 HVZ 545 y Klebsiella pneumoniae ATCC KPC, y la sensibilidad de E. coli ATCC 25922 y K. pneumoniae BAA 1706. La bacteria con mejor respuesta antagónica fue B. parabrevis y la bacteria más susceptible a dichas actividades antagónicas fue E. coli BLEE 4156 HVZ 545. Este estudio demostró por primera vez que las bacterias del género Bacillus provenientes de la Cueva de los Tayos poseen mecanismos antagónicos efectivos sobre cepas de E. coli resistente a antimicrobianos.Item Open Access Evaluación microbiológica de la calidad del aire en tres zonas del Centro Cultural-PUCE(PUCE - Quito, 2023-06-16) Montenegro Echanique, Emilia Alicia; Santacruz Flores, Fernando RenéEl Centro Cultural-PUCE es una institución que exhibe y mantiene una gran colección de bienes históricos como las momias de Maranga, documentos, textiles, entre otros, que han presentado signos de deterioro. Por eso, el presente estudio tiene como objetivo determinar la calidad microbiológica del aire del lugar y estudiar a los microorganismos que puedan influir en el biodeterioro en base a su capacidad enzimática. Se realizó un muestreo en tres zonas mediante método volumétrico en agares Plate Count, Papa Dextrosa, Carboximetilcelulosa, Almidón y Gelatina. Se determinó la concentración microbiana en cada área y la capacidad de degradación enzimática de los aislados. Posteriormente, los microorganismos con índice enzimático mayor a 1,5, fueron caracterizados macroscópica y microscópicamente e identificados mediante técnicas moleculares. Se registró una mayor carga microbiana en la oficina de los curadores entre las áreas evaluadas. Se encontraron 38 microorganismos con capacidad de degradación amilolítica, celulolítica y proteolítica en todas las zonas analizadas, 17 de ellos con un alto índice de degradación. Los géneros Penicillium, Priestia, Streptomyces y Pseudarthrobacter presentaron un índice enzimático más elevado, de 2,78, 4, 5,67 y 2,17, respectivamente. Por lo que, se confirma la presencia de microorganismos con alto potencial de degradación que puede aportar en gran medida al biodeterioro.