Tesis - Microbiología Clínica y Aplicada (Sin Restricción)

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Caracterización molecular y análisis filogenético de hongos microscópicos asociados a manchas foliares en hojas de uvilla (Physalis peruviana L.) en varias localidades del cantón Quito, Pichincha.
(PUCE - Quito, 2016) Díaz Granda, José Luis; Yánez Altuna, Jeniffer Marcela
Los cultivos de uvilla (Physalis peruviana L.) son susceptibles a diversos factores físicos, químicos y biológicos que afectan a varias estructuras de la planta, principalmente a las hojas. En Ecuador se han identificado morfológicamente a los hongos responsables de patologías en el tejido foliar sin llegar a nivel de especie. En este trabajo se caracterizó molecularmente hongos microscópicos aislados de manchas foliares en hojas de uvilla en el cantón Quito. Además, se realizó un análisis filogenético mediante la aplicación de los métodos de Neighbor joining (NJ), Maxima Verosimilitud e Inferencia Bayesiana para dar un mayor soporte a la identificación. La identificación molecular de 130 aislados de microhongos se realizó mediante la amplificación de la región ITS (Espaciadores Internos Transcritos) del ADN ribosomal. Las secuencias de ADNr obtenidas fueron comparadas con aquellas disponibles en el GenBank del NCBI mediante el uso de la herramienta BLAST, obteniendo porcentajes de identidad de 97 a 100%. Como resultado, se identificaron 41 especies distintas de microhongos pertenecientes al phylum Ascomycota. Los hongos Alternaria sp., A. tenuissima, Epicoccum nigrum, Diaporthe sp., Xylaria multiplex y Colletotrichum brevisporum fueron aislados en cantidades mayores que las demás. El género Alternaria cuenta con el mayor número de especies, las cuales están asociadas a patologías en la hoja de uvilla. El análisis filogenético utilizó como matriz las secuencias de los aislados y secuencias de GenBank para la generación de dos árboles filogenéticos. El árbol Bayesiano resultante fue el mejor en cuanto a topología y valores de soporte (≥0,95).
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Caracterización fenotípica y genotípica del bacteriófago 5Q18 activo contra Escherichia coli enteropatógena multirresistente
(PUCE - Quito, 2016) Egas Vivero, Pablo Roberto; Bayas-Rea, Rosa de los Ángeles
Escherichia coli enteropatógena (ECEP) es un patotipo de E. coli relacionado con diarreas infecciosas que afectan especialmente a niños. En el Ecuador, las diarreas de tipo infecciosa representan la sexta causa de muerte. El abuso de antibióticos para tratar diferentes tipos de infecciones ha generado multirresistencia por parte de las bacterias, lo cual se ha vuelto un serio problema de salud pública. Esta situación ha causado una escases de antibióticos eficaces, por lo que, la fagoterapia resulta ser una alternativa para el tratamiento de bacterias multirresistentes en los países occidentales. El presente estudio tuvo como objetivo la caracterización fenotípica y genotípica del bacteriófago 5Q18 con actividad lítica contra ECEP multirresistente. Para lo cual se colectó muestras de agua del río Machángara con el fin de aislar un fago con actividad lítica. Una vez que se aisló el fago se lo tituló mediante el ensayo de doble agar con la cepa ECEP 14 multirresistente. La actividad lítica contra ECEP 14 se evaluó mediante la cinética de lisis del fago. Por otro lado, la caracterización morfológica del fago 5Q18 se realizó mediante microscopía de transmisión electrónica; mientras que, para la caracterización molecular se purificó el ADN del fago en base a dos metodologías: i) un protocolo modificado y ii) el kit Wizard® Genomic DNA Purification kit de Promega. Después, el ADN fue cortado con la enzima de restricción XbaI para determinar el tipo de material genético. Finalmente se realizó un ensayo de actividad in vitro con dos tratamientos y tres repeticiones para comprobar la actividad lítica del fago contra ECEP 14. Como resultados de la microscopía de transmisión electrónica se determinó que el bacteriófago 5Q18 pertenece a la familia Myoviridae del orden Caudovirales con un genoma de 20 Kb. Además se encontró que el fago tiene un amplio espectro de actividad lítica frente a miembros de la especie E. coli tanto comensal como a dos patotipos, ECEP y ECEH; en particular, contra la cepa ECEP 14 multirresistente. La actividad bactericida del fago 5Q18 sobre ECEP 14 fue más alta que el ácido láctico que se usa como preservante en la industria alimenticia. En conclusión, en base a los equipos y materiales disponibles en el país se pudo caracterizar al fago 5Q18. Además, debido a las características que presenta este fago se lo puede considerar como un agente biocontrolador de E. coli enteropatógena multirresistente, por lo que, el fago podría ser aplicado en la industria alimenticia.
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Control microbiológico de cosméticos elaborados artesanalmente en base de productos naturales en la ciudad de Quito
(PUCE - Quito, 2012) Andrade Estévez, Ana Carolina; Valdiviezo Aguilar, Ana Belén; Granda Moreno, Elena Isabel
Se considera un producto artesanal elaborado ya sea, totalmente a mano o con la ayuda de herramientas manuales o incluso medios mecánicos, con la contribución manual directa del artesano como el componente más importante del producto acabado. Los productos artesanales se producen sin limitación y utilizando materias primas procedentes de recursos sostenibles. En el presente trabajo de investigación se analizaron muestras de cosméticos de elaboración artesanal de dos lugares del centro de Quito, a los cuales se los ha denominado como “Fabricante 1” y “Fabricante 2”, con el fin de chequear la seguridad para los consumidores de estos productos, por el riesgo que corren cuando estos no son manejados con los cuidados microbiológicamente esenciales. Los resultados encontrados fueron: los productos del Fabricante 1 presentaron un 100% de contaminación en comparación con los productos del Fabricante 2 en donde no se obtuvo presencia de microorganismos patógenos. Las muestras analizadas corresponden a: loción, mascarilla, crema y colirio. Las pruebas microbiológicas requeridas en cosméticos son: Recuento total Mesófilos Aerobios, Recuento de Mohos y Levaduras, Ausencia/Presencia de Staphylococcus aureus, Ausencia/Presencia de Pseudomonas aeruginosa, Ausencia/Presencia Burkholderia cepacia, Ausencia/Presencia de Coliformes totales. Escherichia coli, Ausencia/Presencia de Candida albicans. Se trabajó con el kit comercial COSMETIKIT de la casa comercial Microkit, el cual se basa en la Norma UNE-EN-ISO 16140:2003; el mismo que nos brindó el material adecuado para la realización de los análisis.
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Diversidad de hongos asociados a lesiones foliares en naranjilla (Solanum quitoense Lam.) en varias localidades de la Amazonía Ecuatoriana, 2015.
(PUCE - Quito, 2016) Dávila Lara, María Fernanda; Yánez Altuna, Jeniffer Marcela
La naranjilla o lulo es un cultivo nativo de los Andes, con gran importancia a nivel nacional e internacional por sus propiedades nutritivas y/o por ser una fruta perfecta para la agroindustria. Sin embargo, su producción se ha visto afectada por infecciones causadas por microorganismos fitopatógenos, especialmente por hongos. El presente estudio fue desarrollado para conocer la diversidad de hongos que se encuentran asociados a lesiones foliares de naranjilla de varias localidades de la Amazonía ecuatoriana. Cinco localidades fueron escogidas en las provincias de Napo, Orellana, Pastaza y Morona Santiago. Cuarenta muestras fueron procesadas para obtener 266 hongos aislados, de los cuales 156 fueron identificados molecularmente mediante la secuenciación de la región ITS (Espaciadores Internos Transcritos) del ADN ribosomal. Las secuencias obtenidas fueron comparadas mediante la herramienta BLAST del Banco de Genes del NCBI, consiguiendo porcentajes de similitud y homología del 100%, encontrándose además 29 especies de hongos que actúan en su mayoría como endófitos. Los índices ecológicos de Shannon, Simpson y Pielou aplicados permitieron establecer que la localidad con mayor índice de diversidad es la de Pindo Mirador- Pastaza. El análisis de las comunidades en forma multidimensional, por medio del índice de Bray Curtis, demostró que la localidad de Pindo Mirador- Pastaza es muy diferente del resto de localidades en cuanto a la composición de especies. Por otro lado, el análisis Simper permitió determinar que Phomopsis sp., Diaporthe sp., D. citri, D. schini, Xylaria berteri, Colletotrichum boninense, C. lupini y Neurospora tetrasperma fueron las especies que más contribuyeron a la diferenciación de cada una de las localidades. Sin embargo, estos resultados se encontraron sesgados por un mayor esfuerzo de muestreo realizado en la localidad de Pindo Mirador- Pastaza. Finalmente, la topología del árbol filogenético procedente del método Neighbor-Joining reveló la formación de tres ramificaciones principales con siete grupos del phylum Ascomycota. El árbol fue robusto y significativo al obtener valores superiores o iguales a 70 sobre cada una de las ramas.
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Comparación de los recuentos de las placas Petrifilm TM ec/coliformes para la determinación de coliformes totales y e. coli con el medio m-coliblue24 para análisis de agua potable
(PUCE - Quito, 2011) Ramos Endara, Johanna Alexandra
El presente estudio tiene como finalidad buscar una alternativa de adaptación en el ensayo establecido para el análisis de coliformes totales y E. coli en agua potable, para reemplazar el medio de cultivo empleado en el método de filtración por membrana (m-Coliblue24), con la utilización de las 3M placas Petrifilm EC (E. coli – coliformes). Comparando los resultados obtenidos así como también todos los pasos previos a la realización del ensayo. Para la comparación se eligió un rango A (alto), Rango B (medio) y Rango C (bajo), la determinación de cada uno de los rangos, se tomó como base los recuentos preestablecidos por la casa comercial Millipore para el recuento de coliformes totales entre 20 y 80, E. coli entre 20 y 60; se utilizaron un total de 180 muestras; 60 en cada uno de los rangos y 30 para cada uno de los medios.
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Evaluación del crecimiento de phellinus SPP en diferentes sustratos
(PUCE - Quito, 2010) Jativa, Hugo David; Oña Neacato, José Enrique; Egas Benavides, Josefina Gloria María
En el Parque Nacional Yasuní existe una gran biodiversidad de flora y fauna, la cual incluye a los organismos pertenecientes al reino fungi. Este proyecto se planteó realizar el cultivo in vitro de las cepa de Phellinus sp. encontradas en nuestra expedición por el Parque Nacional Yasuní; para esto se comparó el desarrollo de las cepas de este hongo según el sustrato utilizado en el medio de cultivo. Los sustratos utilizados fueron aserrín de álamo, aserrín de eucalipto, aserrín de roble y aserrín común. Los resultados reflejaron una variación significativa en el desarrollo analizando la productividad de las cepas utilizadas, mientras que no hubo una diferencia significativa entre los sustratos analizados, el medio agar extracto de malta fue en el que mejor desarrollo se obtuvo de las cepas de hongos.
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Diseño de una guía para el manejo y manipulación de alimentos por parte de los proveedores escolares en las Unidades Educativas del Milenio, región Sierra-Ecuador, 2015
(PUCE - Quito, 2015) Paz Viera, David Fabián; García Paredes, Yolanda Cecilia
El Instituto de Provisión de Alimentos, PROALIMENTOS, es una institución creada con el objeto de proveer alimentos para las instituciones públicas que por su carácter de servicio social así lo requieran, este objetivo debe desarrollarse por política estatal, en un ámbito de “Economía Popular y Solidaria”, donde los actores que presten el servicio o sean contratados por Proalimentos deben pertenecer a sectores con un nivel de vulnerabilidad económica alto, enfocándose a la política gubernamental de generar oportunidades para los sectores históricamente olvidados de la sociedad. En este sentido, Proalimentos ha tomado a su cargo como plan piloto, la provisión de almuerzos escolares para los beneficiarios que pertenecen al Ministerio de Educación, correspondientes a Unidades Educativas del Milenio y Colegios réplica de la Sierra del Ecuador; debido a las condiciones citadas como características obligatorias de los proveedores del servicio, se ha generado la necesidad de vincularlos en proyectos de capacitación permanente con el objetivo de generar un régimen de calidad constante en los productos y servicios que se entregan a los usuarios. En base al requerimiento mencionado se crea la necesidad de elaborar un documento técnico que mencione y proponga directrices y consejos relacionados a gestionar la calidad de los procesos que se llevan a cabo durante la preparación de alimentos para las Instituciones Educativas. Se toman en cuenta algunos reglamentos vigentes a nivel nacional, además del análisis de estadísticas relacionadas con las consecuencias que trae la mala manipulación de alimentos a nivel País, para proponer los temas entorno a los cuales se elabora el manual, además se propone un sistema de monitorización permanente del servicio de preparación y entrega de alimentos. Por último se determina una malla curricular como propuesta para capacitar formalmente a los proveedores del servicio de preparación y entrega de alimentos, con el objetivo de cerrar el círculo académico y aumentar considerablemente los niveles de calidad del servicio que los usuarios reciben en las instituciones educativas.
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Evaluación de la producción de fumonisinas en Fusarium proliferatum en respuesta a dosis sub inhibitorias de fungicida (Iprodiona)
(PUCE - Quito, 2016) Anasi Castillo, Gabriela Estefanía; Yánez Altuna, Jeniffer Marcela
Se ha demostrado que varios hongos fitopatógenos presentes en cultivos de importancia económica a nivel mundial experimentan un fenómeno hormético, es decir una estimulación metabólica en lugar de una inhibición cuando éstos son expuestos a dosis sub inhibitorias de fungicidas. Esto representa un problema al momento de manejar efectivamente las enfermedades producidas por estos hongos. Fusarium proliferatum es un hongo fitopatógeno que provoca daño a nivel agrícola y de salud humana, no obstante, existen insuficientes estudios que indiquen que F. proliferatum experimenta fenómenos horméticos. Por todo lo anterior, el presente estudio tiene como objetivo principal: evaluar el efecto de dosis sub inhibitorias de iprodiona en F. proliferatum in vitro. Se experimentó con dos aislados de F. proliferatum resistentes a la molécula química iprodiona (A7, altamente productor de fumonisina y A1, no productor de fumonisina). Siete dosis del fungicida fueron utilizadas para modificar el medio de cultivo PDA y así evaluar dos aislados del hongo en términos de área de crecimiento radial, mientras que cuatro dosis del mismo fungicida fueron utilizadas para modificar un medio de cultivo a base de maíz partido y evaluar en éste los dos aislados del hongo en términos de producción de fumonisina. Una concentración de 0.40 ppm de iprodiona causó una estimulación máxima del 7% del crecimiento radial en el aislado A1, de manera que los análisis horméticos permitieron modelar una curva bifásica. Si bien una dosis sub inhibitoria menor exhibió un incremento del 13%, una respuesta hormética bajo dicha dosis no fue estadísticamente demostrable. Aunque en el aislado A7 se notó una estimulación de un 10% del crecimiento micelial a una dosis de 0.12712 ppm, y un 16% de incremento en la producción de fumonisina provocado por una dosis de 0,012712 ppm, los datos no fueron estadísticamente verificables, de manera que fueron representados por una curva no-hormética. Este es el primer estudio en donde se demuestra que las dosis sub inhibitorias de iprodiona provocan un fenómeno hormético en el crecimiento radial de F. proliferatum. A futuro se debería considerar estos hallazgos, para realizar un manejo más efectivo de los cultivos afectados por F. proliferatum.
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Efecto antibacteriano del agua de plata sobre microorganismos indicadores de contaminación aislados de manos de manipuladores de alimentos de cuatro cafeterías de un centro de educación superior
(PUCE - Quito, 2016) Jara Santamaría, Verónica Michelle; Granda Moreno, Elena Isabel
Se evaluó la efectividad del uso de agua de plata en la reducción de microorganismos indicadores de contaminación (Mesófilos aerobios, Escherichia coli, Coliformes totales y Staphylococcus aureus) procedentes de manipuladores de alimentos que preparaban los alimentos en diferentes cafeterías de un centro de educación superior. El estudio se realizó un estudio con 24 muestras resultantes del lavado de manos de manipuladores de alimentos que se encontraban en su jornada laboral, se cuantificó la carga bacteriana de Mesófilos aerobios, Coliformes totales/Escherichia coli y Staphylococcus aureus en sus manos. Se encontró que el 100% de las muestras presentaron un crecimiento >3000 UFC/mano incumpliendo el limite permisible para Mesófilos aerobios, para Coliformes totales el 50 % de las muestras se encontraron por encima del límite permisible de ≤100 UFC/mano, Escherichia coli estuvo presente en 4.16% de las muestras mientras que Staphylococcus aureus se encontró dentro del límite permisible de ≤100 ufc/mano en 58.33% de las muestras. Después de la aplicación de agua de plata, usando un diseño de experimento factorial de dos factores y el análisis de varianza (ANOVA) se encontró que la variable que interviene en la una reducción significativa (p<0,05) de la carga bacteriana es el tiempo de contacto, excepto para el indicador de contaminación Staphylococcus aureus. En este caso ninguna de las variables (tiempo y concentración, ni la interacción de ambas variables) reduce significativamente su contaje inicial. En conclusión, la aplicación del agua de plata durante 5 minutos es efectiva para la reducción o eliminación de microorganismos indicadores de contaminación presentes en las manos de manipuladores de alimentos.
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Evaluación microbiológica de la presencia de hongos en ambientes de la Escuela de Bioanálisis de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador mediante la aspiración de volumen de aire en tiempo definido como una de las causas del Síndrome del Edificio Enfermo durante el 2011.
(PUCE - Quito, 2012) Rivadeneira Calvache, Daniela Alexandra; Granda Moreno, Elena Isabel
La presencia de esporas y estructuras fúngicas, diseminadas en el aire de ambientes internos pueden ser inhaladas en varias concentraciones, constituyendo una fuente de contaminación, que puede provocar alergias, asma, rinitis, bronquitis crónica, hasta alteraciones físicas y mentales como estrés e incomodidad que influyen en el rendimiento laboral. La Escuela de Bioanálisis, funciona en dos edificios: Edificio de Ciencias Exactas y Naturales y Edificio de Microbiología, en los que se encuentran distribuidos: oficinas, aulas, baños, auditorios y laboratorios. Estos espacios han perdido modernidad y a ello se suman factores como humedad, falta de ventilación, temperatura inadecuada, iluminación deficiente que posibilitan la presencia de hongos y el desarrollo del Síndrome del Edificio Enfermo. La metodología aplicada para el muestreo de aire fue la de captación por impacto activo y con la cual se obtuvieron 59 muestras de los 31 lugares analizados. Se identificaron 22 géneros de hongos mediante el cultivo en el laboratorio, siendo el Cladosporium spp., con un 90,32% el género más contaminante, seguido de Penicillium spp., con un 64,52%, luego el Rhizopus spp., y el Helminthosporium spp., con un 32,3% respectivamente, en los ambientes analizados de los dos edificios. Para el cultivo de los hongos se utilizo dos medios, el Agar Papa Dextrosa y el Agar Rosa de Bengala, resultando este último más selectivo y de gran utilidad en el recuento e identificación de estos microorganismos.
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Evaluación de la actividad bactericida del agua de plata sobre ensaladas listas para el consumo en cafeterías de una institución de educación superior
(PUCE - Quito, 2015) Bonifaz Panamá, David Alejandro; Granda Moreno, Elena Isabel
El presente estudio se realizó con el objetivo de determinar la mejor concentración del agua de plata y el tiempo de contacto para inhibir el crecimiento bacteriano en ensaladas listas para el consumo de las cafeterías de una institución de educación superior. Se realizó el muestreo de la totalidad de las ensaladas que son parte del menú de las cuatro cafeterías de la institución. Para su análisis se utilizaron placas Petrifilm para la detección de mesófilos aerobios, mohos y levaduras y E. coli/coliformes; se manejó la primera dilución de la muestra para la siembra y se enfrentó en volúmenes iguales con las concentraciones 4 ppm y 10 ppm del agua de plata; al primer minuto de contacto se realizó la primera siembra en las placas de los tres microorganismos indicados y luego de transcurridos 5 minutos nuevamente se realizó otra siembra. Las placas fueron incubadas de acuerdo a sus requerimientos y transcurrido el tiempo de incubación se realizó el recuento de las mismas. Finalmente, se logró cumplir con los objetivos propuestos ya que desde el punto de vista microbiológico, el agua de plata disminuyó considerablemente la población bacteriana inicial de las ensaladas muestreadas hasta valores inferiores a m, lo que representa que son aceptables para el consumo humano según el Real Decreto 3484/2000 BOE 12/1/2001 para comidas preparadas sin tratamiento térmico y comidas preparadas con tratamiento térmico, que lleven ingredientes no sometidos a tratamiento térmico. La mayor concentración y el mayor tiempo de contacto fueron los factores eficaces para la disminución de la carga microbiana inicial a excepción de los mohos, donde se evidenció que por su diferente estructura a la de las bacterias no presentó una disminución considerable.
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Evaluación del efecto antimicótico de bacterias aisladas de la piel de sapos Hyloxalus de la torreae, Hyloscirtus larinopygion, Pristimantis Pyrrhomerus y Pristimantis sp. de la localidad de Morán (Provincia del Carchi) frente al hongo patógeno Batrachochytrium dendrobatidis.
(PUCE - Quito, 2014) Garzón Larrea, Milena Jazmím; Palacios Bonifaz, Pablo Santiago
En el Ecuador casi una de cada tres especies de anfibios está amenazada con extinción, esto corresponde a 148 especies equivalente a 31,3%. Los declines de anfibios neotropicales se sugieren por efectos sinérgicos entre varios factores al cambio climático, pérdida de hábitat y quitridiomicosis. La quitridiomicosis es una enfermedad infecciosa asociada a los declines de anfibios a nivel mundial que es causada por el hongo Batrachochytrium dendrobatidis. El patógeno afecta directamente la piel del anuro la cual regula el funcionamiento del intercambio de gases respiratorios y agua, provocando un desequilibrio osmótico y la reducción en las concentraciones de electrolitos plasmáticos que llevan al deterioro del funcionamiento eléctrico y la muerte. Por otro lado se conoce que las bacterias presentes como simbiontes en la piel son las que ayudan a la persistencia de algunas poblaciones de anfibios frente a esta infección. El presente estudio es descriptivo y tiene como objetivo evaluar el efecto antimicótico de las bacterias aisladas de la piel de anuros frente al hongo patógeno. Para cumplir con este objetivo se analizaron 12 anuros de cuatro especies distintas de las cuales se aislaron bacterias de la piel que fueron probadas en los respectivos ensayos de antagonismo para su posterior identificación molecular. En este estudio se logró aislar un total de 147 morfotipos bacterianos de la piel de cuatro especies de anuros de los cuales 67 morfotipos presentan inhibición, además el mayor número de morfotipos bacterianos con inhibición que se identificaron pertenecen al género Pseudomonas de las especies de anfibios analizados, Pristimantis pyrrhomerus una especie amenazada que tiene la mayor inhibición frente al patógeno. Concluyendo que existen bacterias en la piel de los anfibios analizados que inhiben in vitro el crecimiento de Batrachochytrium dendrobatidis.
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Prevalencia de Streptococcus pneumoniae por medio de la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en muestras nasofaríngeas de niños menores de 5 años de edad de la ciudad de Quito
(PUCE - Quito, 2011) Miranda Tapia, Gabriela Fernanda
Streptococcus pneumoniae es un importante colonizador de la nasofaringe, capaz de causar varias enfermedades. Principalmente afecta a niños menores de 5 años y a personas mayores de 60 años. Objetivos: Determinar la prevalencia de Streptococcus pneumoniae por medio de la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en muestras nasofaríngeas de niños menores de 5 años de edad de la ciudad de Quito. Establecer la diferencia de la prevalencia al comparar las técnicas de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) frente al cultivo microbiológico convencional considerado como la prueba de referencia. Determinar la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, y valor predictivo negativo de la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) convencional frente al cultivo microbiológico.
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Biodiversidad fúngica endófita y epífita de Citrus sinensis, naranjo dulce, de dos localidades de la Región Litoral del Ecuador
(PUCE - Quito, 2016) Moya Maldonado, Alexandra Elizabeth; Yánez Altuna, Jeniffer Marcela
La naranja dulce, Citrus sinensis, es cultivada y comercializada en todo el mundo. La biodiversidad fúngica endófita y epífita de esta especie vegetal proveniente de dos localidades de la región litoral del Ecuador fue investigada. Un total de 96 muestras (hojas sanas, frutos sanos y frutos con presencia de lesiones superficiales) de la localidad de Quevedo-Los Ríos y El Empalme-Guayas, fueron procesadas en los laboratorios de la Escuela de Bioanálisis de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador. Cuarenta y nueve hongos tanto endófitos como epífitos se aislaron. Para la identificación molecular, se realizaron extracciones de ADN y secuenciaciones de la región ITS de los genes ribosomales. Mediante la herramienta BLAST se comparó las secuencias del estudio con las del Banco de Genes del NCBI, de esta forma se identificaron treinta y tres hongos a nivel de género y se obtuvieron 18 especies distintas. Tanto en la micobiota endófita como epífita, Epicoccum sp. fue el género más abundante. E. nigrum fue la especie epífita más aislada; mientras que Fusarium sp. fue el segundo género endófito más frecuente. La diversidad de hongos endófitos y epífitos fue determinada utilizando los índices ecológicos: Riqueza de especies, Margalef, Shannon-Viewer, Simpson y Jaccard. La localidad de Quevedo posee una mayor riqueza de especies y un índice de Margalef mayor (4.6). Además, los resultados sugieren que Quevedo posee alta heterogeneidad (H`=2.58) mientras que la localidad de El Empalme muestra una dominancia de especies mayor (D= 0.18) especialmente del hongo Epicoccum nigrum. Únicamente tres especies fueron compartidas por las dos localidades Epicoccum nigrum, Epicoccum sp. y Leptosphaerulina chartarum (Ij=0,38). Este estudio demuestra que, Citrus sinensis está constituido por micobiota endófita y epífita variada. El análisis filogenético basado en el método Neighbor- Joining generó un dendograma con Ascomycota como grupo general y cinco grupos internos pertenecientes a la subdivisión Pezizomycotina.
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Diversidad de hongos endófilos relacionados con lesiones necróticas en fréjol común (Phaseolus vulgaris L.) en la provincia de Loja, Ecuador, 2013
(PUCE - Quito, 2014) Cornejo Espinoza, Francisco Javier; Yánez Altuna, Jeniffer Marcela
La diversidad de hongos endófitos en lesiones necróticas de fréjol (Phaseolus vulgaris L.) cultivado en diversos cantones de la provincia de Loja fue evaluada. Cien muestras fueron procesadas en los laboratorios de la Escuela de Bioanálisis de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador (PUCE). Un total de sesenta hongos fueron aislados e identificados, los cuales fueron obtenidos de tejidos de hojas, vainas y tallos. La identificación molecular de estos microorganismos se realizó mediante secuenciación de la región ITS (Espaciadores Internos Transcritos) de los genes ribosomales. Las secuencias fueron comparadas con aquellas disponibles en el Banco de Genes del NCBI mediante la herramienta BLAST, obteniendo así porcentajes de similitud entre el 98% y 100%. Como resultado se encontró veinte y ocho especies distintas, las cuales fueron tomadas como nuestras unidades operacionales taxonómicas (OTUs). Los índices ecológicos de Shannon y Simpson fueron utilizados en este estudio para determinar la diversidad de hongos endófitos en el fréjol común. En general, la diversidad de los hongos endófitos fue elevada (1,28) y las especies dominantes fueron Epicoccum nigrum, Boeremia telephii, Fusarium sp. y Alternaria tenuissima, conocidos todos como endófitos típicos y productores de atractivos metabolitos de gran beneficio para la planta y con interés biotecnológico. La construcción del árbol filogenético utilizando el método de Neighbor-Joining arrojó ocho agrupamientos, de los cuales seis pertenecieron al filo Ascomycota, uno a Basidiomycota y el octavo fue el grupo externo.
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Evaluación de la actividad germicida de desinfectantes de uso doméstico vendidos en cuatro cadenas de supermercados de la ciudad de Quito
(PUCE - Quito, 2015) Chávez Escalante, Paúl Sebastián; Sánchez Franco, Carlos Fabricio; Granda Moreno, Elena Isabel
En el siguiente estudio se muestrearon 45 desinfectantes adquiridos en diferentes cadenas de supermercados de la ciudad de Quito correspondientes a zonas del norte, centro y sur, durante los meses de septiembre, octubre y noviembre del 2013. Se procedió a realizar este muestreo aleatorio para obtener la mayor cantidad de variedad en el número de lote del producto y justificar el estudio. El producto se evaluó frente a 5 diferentes microorganismos, cepas ATCC específicas a escala MacFarland 2, con 3 concentraciones del producto. El estudio mostró una diferencia significativa en cuanto a su acción germicida, la misma que está relacionada con las variables concentración y tiempo de contacto frente a los microorganismos evaluados entre las distintas marcas de los desinfectantes. Para mantener la confidencialidad de los productos evaluados se procedió a codificarlos en todo el estudio
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Verificacion del proceso de limpieza y desinfección de superficies en cafeterías mediante métodos microbiológicos y de Bioluminiscencia de ATP
(PUCE - Quito, 2012) Lara Galarza, Pedro Sebastián; Granda Moreno, Elena Isabel
El presente estudio se realizó con la finalidad de verificar el procedimiento de limpieza y desinfección de las superficies en contacto con los alimentos de las cafeterías de un centro universitario de la ciudad de Quito administrado por la Empresa de Servicios Hoteleros y de Alimentos y Bebidas “XSERSA”. Se efectuó el muestreo de 200 superficies en 2 cafeterías antes y después del proceso de limpieza y desinfección, mediante la técnica de bioluminiscencia de ATP con equipos de la compañía 3M: luminómetro portátil UNI-LITE NG y los hisopos CLEAN TRACE. Las superficies muestreadas se distribuyeron de la siguiente manera: 50 del área de despacho de almuerzos de la cafetería 1, 50 del área de preparación de ensaladas frías de la cafetería 1, 50 del área de despacho de desayunos y almuerzos de la cafetería 2 y 50 del área de preparación de sanduches de la cafetería 2. De las superficies que se encontraron fuera del parámetro aceptable de la técnica de bioluminiscencia (≤ 300 URL), se realizó la siembra en procura de mesófilos aerobios con el objetivo de comprobar si esas superficies presentaban contaminación con microorganismos, con materia orgánica o ambos. Analizando los resultados se encontró que el 80% de las superficies no fueron aptas para producir o despachar alimentos porque estuvieron fuera de los parámetros aceptables y por consiguiente contaminados, y solo el 20% fueron aptas para preparar o despachar alimentos. Del total de superficies contaminadas o sucias el 26% correspondió a contaminación por mesófilos aerobios y el 74% fue por causa de materia orgánica. Finalmente, se procedió a realizar una capacitación a todo el personal de la empresa sobre la limpieza y desinfección y la importancia de establecer procedimientos operativos estandarizados de saneamiento (POES) para la implementación a futuro de un sistema de aseguramiento de la calidad.
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Comparación de los marcadores de infección (PCR, temperatura corporal, eritrosedimentación y leucograma) en pacientes de terapia intensiva del Hospital Eugenio Espejo de junio - agosto del 2009
(PUCE - Quito, 2011) Luna Vega, Beatriz del Rocío; Rodríguez Anangonó, Daniel Alejandro; Pérez, Alfredo
Se efectúa un estudio para determinar que la utilización de la Proteína C Reactiva hs es un marcador biológico de alta importancia como pronóstico de los procesos infecciosos e inflamatorios en la Unidad de Terapia Intensiva en la ciudad de Quito, el cual fue realizado en el transcurso de tres meses que corresponden desde junio- agosto del año 2009. Se tomó un total de 140 muestras de pacientes mayores a 16 años de edad. El estudio se lo ejecutó en el Hospital Eugenio Espejo” Quito. Las determinaciones de la Proteína C Reactiva se realizó por medio del método PCR (LATEX) hs. Los resultados obtenidos en esta investigación, indican que la Proteína C Reactiva es un marcador muy sensible, el cual fue comparado con otros marcadores de infección, presentando los resultados esperados para el PCR, por tanto se demuestra que es una prueba útil y necesaria. Ya que puede elevarse rápidamente ante una infección independientemente del diagnóstico del paciente, lo que no ocurre con otros marcadores como: la temperatura corporal y la velocidad de sedimentación globular.
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Uso de residuos celulósicos de la agroindustria para la producción de bioetanol
(PUCE - Quito, 2010) Vega Marín, Mario Alejandro; Luna Unda, Cecilia Verónica
La materia orgánica con alto contenido de celulosa ofrece gran potencial, como materia prima, para la elaboración de varios productos de interés industrial. Sin embargo su uso está restringido principalmente para la industria papelera y elaboración de carbón vegetal. La falta de uso de esta materia se debe principalmente a la recalcitrancia de la materia celulósica para lograr transformarla en sus componentes primarios, y a los costos que suponen transformarlos mediante procesos químicos. Una manera de utilizar esta materia, es usando procesos biológicos, puntualmente procesos enzimáticos que resultan mucho más baratos que los procesos químicos, con la ventaja de que no producen contaminación alguna. Un uso que se puede dar a la materia celulósica, y como alternativa ambiental utilizar residuos agroindustriales, es la elaboración de biocombustibles, como el bioetanol, para solucionar en parte el agotamiento de los recursos energéticos basados en petróleo, y enfrentar los problemas de contaminación ambiental.
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Aislamiento y evaluación de la viabilidad de cianobacterias de la Rizósfera de plantas leguminosas cultivadas en la parroquia Poaló, Latacunga – Cotopaxi.
(PUCE - Quito, 2014) Martínez Pérez, Raquel Estefanía; Morales Avendaño, Ever Darío
En el Ecuador, los recursos agrícolas representan una parte importante del potencial económico, de ahí que el uso de biofertilizantes representan una alternativa para la sustitución de fertilizantes químicos pues estos proporcionan mayor rentabilidad económica, aumentan la productividad de los cultivos, reducen los efectos de la fertilización química sobre el medio ambiente y la salud. Es por eso que en el presente trabajo se reporta la evaluación de consorcios con cianobacterias aisladas de suelos agrícolas para determinar su viabilidad y su potencial biofertilizante. Las cianobacterias se aisladaron en medio sólido BG11o, de muestras tomadas de leguminosas completas con su raíz y rizósfera, cultivadas en la Parroquia Poaló ubicada al noroeste de la ciudad de Latacunga, Provincia de Cotopaxi. Las cianobacterias fijadoras de nitrógeno aisladas fueron Nostoc sp., Anabaena sp. y Calothrix sp. De la fase de escalamiento de los consorcios con estas cianobacterias se obtuvo un volumen final de 45 L, a partir del cual se cosechó la biomasa, producto de la sedimentación del cultivo, en un volumen de 1.125 L. Previa a la inoculación de los diferentes tratamientos se realizó un análisis físico-químico del suelo en donde se obtuvo que el porcentaje de materia orgánica era de 1.93%, nitrógeno 0.10%, fósforo 49.6 ppm, y azufre 13.08 ppm. Posteriormente se inocularon 12 bandejas con 2 kg de suelo cada una, procedente del mismo lugar de donde fueron aisladas las cianobacterias, cada una con cuatro tratamientos: testigo (400 mL de agua destilada), fertilizante químico (400 mL), consorcio de cianobaterias (250 mL de consorcio + 150mL de agua destilada) y fertilizante químico + consorcio de cianobacterias (125 mL de consorcio +75 mL de agua destilada). Los resultados de las evaluaciones de nutrientes de los diferentes tratamientos evidenciaron que la combinación de consorcio de cianobacterias y fertilizante químico brindó el contenido más alto de materia orgánica, N y S con 4.5%, 0.23% y 109.8 ppm respectivamente. El segundo contenido más alto de materia orgánica, N y S se reportó en el tratamiento con el consorcio de cianobacterias con 2.2 %, 0.11% y 90.2 ppm respectivamente. Se establece un protocolo para la producción y mantenimiento de consorcios con cianobacterias fijadoras de nitrógeno, medio de cultivo y condiciones de escalado de los cultivos discontinuos. La conformación de consorcios cianobacterias- microalgas en biotecnología agrícola permite ampliar el espectro de microorganismos utilizados en biofertilización de suelos.