Tesis - Microbiología Clínica y Aplicada (Sin Restricción)

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Acción microbicida del agua de plata en muestras de agua de riego del río Pachanlica - provincia de Tungurahua
(PUCE - Quito, 2015) Puente Balda, María Belén; Granda Moreno, Elena Isabel
El riego es indispensable en la agricultura, pues a nivel mundial una cuantiosa cantidad de alimentos provienen de la agricultura de regadío. En el Ecuador, la mayor parte del agua proviene de recursos hídricos superficiales como son los ríos y más de la mitad del agua disponible se utiliza en el riego de cultivos. La problemática recae en que varios recursos hídricos a nivel nacional y en especial en la provincia de Tungurahua tienen altos niveles de contaminación; por lo que, el agua utilizada para el riego no es la adecuada y esto está directamente relacionado con la calidad de productos que se obtiene. Adicionalmente, muchos de los productos de cultivados en Tungurahua son distribuidos para todo el país. Para tener una visión general de la contaminación que puede tener el agua de riego se evaluó la cantidad de microorganismos indicadores, los estándares de calidad se basan en estos grupos de microorganismos. Varios productos son utilizados para la desinfección del agua, siendo uno de estos la plata; la cual se ha empleado con este propósito desde la antigüedad. En el presente estudio se evaluó la capacidad del agua de plata a tres diferentes concentraciones de 4 ppm, 10 ppm y 15 ppm y con tres tiempo de contacto (15, 30 y 60 minutos) para inhibir las bacterias indicadoras (mesófilos aerobios, coliformes totales / Escherichia coli y enterobacterias) presentes en muestras de agua de riego de 16 acequias del río Pachanlica de la provincia de Tungurahua. El estudio permitió conocer que la concentración de 10 ppm a 15 minutos de tiempo de contacto fue la mejor para inhibir crecimiento del grupo de mesófilos aerobios, mientras que para coliformes totales, E. coli y enterobacterias la mejor concentración fue la de 4 ppm a los 15 minutos de tiempo de contacto. En conclusión, el presente estudio evidenció que la plata tiene una potente actividad microbicida.
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Análisis de superficies con identificación de cepas nativas de quirófano, cuartos de recuperación y baños, mediante la técnica de hisopado de superficies, entes y después del uso de desinfectantes en la Clínica de Unidades Médicas de la ciudad de Quito
(PUCE - Quito, 2015) Naranjo Plaza, María de Lourdes; Granda Moreno, Elena Isabel
Dentro del ambiente clínico, la desinfección es de gran importancia para llevar a cabo una atención de calidad al paciente, previniendo toda clase de posibles infecciones de origen nosocomial que puedan afectar a su salud. El presente estudio tiene la finalidad de analizar las áreas de mayor importancia dentro de la Clínica de Unidades Médicas, desagregándola en sub-áreas, en la medida del grado de contacto que los pacientes tienen con aquellas, lo que permitió clasificarlas como ideales para el análisis. Una vez escogidas, éstas se sometieron a comprobación del estado de asepsia y eficacia del desinfectante. Posteriormente, se dividió la toma de muestras en dos fases pre-analíticas: una antes de la desinfección y otra después de la desinfección tomando en cuenta que para los dos casos no podían ser alterados los hábitos normales de asepsia dentro de la Clínica. El análisis estadístico, fue determinante como instrumento de apoyo para el ensayo, y sus resultados arrojaron el hecho comprobado de que en la primera etapa de su aplicación, la carga bacteriana se incrementó después de la desinfección. A continuación, en la segunda etapa del muestreo se hizo una corrección en la metodología de limpieza general de la Clínica y los resultados reflejan una reducción de la carga bacteriana total, manteniendo el incremento después de la desinfección. Las cepas para el control de los medios de cultivo utilizados corresponden a los siguientes microorganismos: Escherichia coli, Candida albicans nativas.
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Control microbiológico de cosméticos elaborados artesanalmente en base de productos naturales en la ciudad de Quito
(PUCE - Quito, 2012) Andrade Estévez, Ana Carolina; Valdiviezo Aguilar, Ana Belén; Granda Moreno, Elena Isabel
Se considera un producto artesanal elaborado ya sea, totalmente a mano o con la ayuda de herramientas manuales o incluso medios mecánicos, con la contribución manual directa del artesano como el componente más importante del producto acabado. Los productos artesanales se producen sin limitación y utilizando materias primas procedentes de recursos sostenibles. En el presente trabajo de investigación se analizaron muestras de cosméticos de elaboración artesanal de dos lugares del centro de Quito, a los cuales se los ha denominado como “Fabricante 1” y “Fabricante 2”, con el fin de chequear la seguridad para los consumidores de estos productos, por el riesgo que corren cuando estos no son manejados con los cuidados microbiológicamente esenciales. Los resultados encontrados fueron: los productos del Fabricante 1 presentaron un 100% de contaminación en comparación con los productos del Fabricante 2 en donde no se obtuvo presencia de microorganismos patógenos. Las muestras analizadas corresponden a: loción, mascarilla, crema y colirio. Las pruebas microbiológicas requeridas en cosméticos son: Recuento total Mesófilos Aerobios, Recuento de Mohos y Levaduras, Ausencia/Presencia de Staphylococcus aureus, Ausencia/Presencia de Pseudomonas aeruginosa, Ausencia/Presencia Burkholderia cepacia, Ausencia/Presencia de Coliformes totales. Escherichia coli, Ausencia/Presencia de Candida albicans. Se trabajó con el kit comercial COSMETIKIT de la casa comercial Microkit, el cual se basa en la Norma UNE-EN-ISO 16140:2003; el mismo que nos brindó el material adecuado para la realización de los análisis.
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Efecto antibacteriano del agua de plata sobre microorganismos indicadores de contaminación aislados de manos de manipuladores de alimentos de cuatro cafeterías de un centro de educación superior
(PUCE - Quito, 2016) Jara Santamaría, Verónica Michelle; Granda Moreno, Elena Isabel
Se evaluó la efectividad del uso de agua de plata en la reducción de microorganismos indicadores de contaminación (Mesófilos aerobios, Escherichia coli, Coliformes totales y Staphylococcus aureus) procedentes de manipuladores de alimentos que preparaban los alimentos en diferentes cafeterías de un centro de educación superior. El estudio se realizó un estudio con 24 muestras resultantes del lavado de manos de manipuladores de alimentos que se encontraban en su jornada laboral, se cuantificó la carga bacteriana de Mesófilos aerobios, Coliformes totales/Escherichia coli y Staphylococcus aureus en sus manos. Se encontró que el 100% de las muestras presentaron un crecimiento >3000 UFC/mano incumpliendo el limite permisible para Mesófilos aerobios, para Coliformes totales el 50 % de las muestras se encontraron por encima del límite permisible de ≤100 UFC/mano, Escherichia coli estuvo presente en 4.16% de las muestras mientras que Staphylococcus aureus se encontró dentro del límite permisible de ≤100 ufc/mano en 58.33% de las muestras. Después de la aplicación de agua de plata, usando un diseño de experimento factorial de dos factores y el análisis de varianza (ANOVA) se encontró que la variable que interviene en la una reducción significativa (p<0,05) de la carga bacteriana es el tiempo de contacto, excepto para el indicador de contaminación Staphylococcus aureus. En este caso ninguna de las variables (tiempo y concentración, ni la interacción de ambas variables) reduce significativamente su contaje inicial. En conclusión, la aplicación del agua de plata durante 5 minutos es efectiva para la reducción o eliminación de microorganismos indicadores de contaminación presentes en las manos de manipuladores de alimentos.
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Evaluación de la actividad bactericida del agua de plata sobre ensaladas listas para el consumo en cafeterías de una institución de educación superior
(PUCE - Quito, 2015) Bonifaz Panamá, David Alejandro; Granda Moreno, Elena Isabel
El presente estudio se realizó con el objetivo de determinar la mejor concentración del agua de plata y el tiempo de contacto para inhibir el crecimiento bacteriano en ensaladas listas para el consumo de las cafeterías de una institución de educación superior. Se realizó el muestreo de la totalidad de las ensaladas que son parte del menú de las cuatro cafeterías de la institución. Para su análisis se utilizaron placas Petrifilm para la detección de mesófilos aerobios, mohos y levaduras y E. coli/coliformes; se manejó la primera dilución de la muestra para la siembra y se enfrentó en volúmenes iguales con las concentraciones 4 ppm y 10 ppm del agua de plata; al primer minuto de contacto se realizó la primera siembra en las placas de los tres microorganismos indicados y luego de transcurridos 5 minutos nuevamente se realizó otra siembra. Las placas fueron incubadas de acuerdo a sus requerimientos y transcurrido el tiempo de incubación se realizó el recuento de las mismas. Finalmente, se logró cumplir con los objetivos propuestos ya que desde el punto de vista microbiológico, el agua de plata disminuyó considerablemente la población bacteriana inicial de las ensaladas muestreadas hasta valores inferiores a m, lo que representa que son aceptables para el consumo humano según el Real Decreto 3484/2000 BOE 12/1/2001 para comidas preparadas sin tratamiento térmico y comidas preparadas con tratamiento térmico, que lleven ingredientes no sometidos a tratamiento térmico. La mayor concentración y el mayor tiempo de contacto fueron los factores eficaces para la disminución de la carga microbiana inicial a excepción de los mohos, donde se evidenció que por su diferente estructura a la de las bacterias no presentó una disminución considerable.
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Evaluación de la actividad germicida de desinfectantes de uso doméstico vendidos en cuatro cadenas de supermercados de la ciudad de Quito
(PUCE - Quito, 2015) Chávez Escalante, Paúl Sebastián; Sánchez Franco, Carlos Fabricio; Granda Moreno, Elena Isabel
En el siguiente estudio se muestrearon 45 desinfectantes adquiridos en diferentes cadenas de supermercados de la ciudad de Quito correspondientes a zonas del norte, centro y sur, durante los meses de septiembre, octubre y noviembre del 2013. Se procedió a realizar este muestreo aleatorio para obtener la mayor cantidad de variedad en el número de lote del producto y justificar el estudio. El producto se evaluó frente a 5 diferentes microorganismos, cepas ATCC específicas a escala MacFarland 2, con 3 concentraciones del producto. El estudio mostró una diferencia significativa en cuanto a su acción germicida, la misma que está relacionada con las variables concentración y tiempo de contacto frente a los microorganismos evaluados entre las distintas marcas de los desinfectantes. Para mantener la confidencialidad de los productos evaluados se procedió a codificarlos en todo el estudio
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Evaluación de la prevalencia de Listeria monocytogenes en productos lácteos y embutidos en tres mercados de la ciudad de Quito mediante la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real
(PUCE - Quito, 2010) Mena Palacios, María Carolina; Granda Moreno, Elena Isabel
La presencia de Listeria monocytogenes constituye un peligro para la salud pública, especialmente cuando se asocia con la ingesta de alimentos listos para consumo ya que mediante una dosis infectiva mínima (<100 UFC/g o mL de alimento) puede causar enfermedad en personas inmunodeprimidas, niños con algún grado de desnutrición, adultos mayores, embarazadas, entre otros grupos de riesgo y al considerar que tanto lácteos como embutidos son productos accesibles a la población y de frecuente consumo, surge la necesidad de evaluar la prevalencia de dicho microorganismo en lácteos y embutidos expendidos en tres mercados de la ciudad de Quito: Mayorista, San Roque e Iñaquito. Por lo cual, se analizaron 100 muestras de yogures y 100 muestras de salchichas obtenidos en dichos puntos de venta. La técnica empleada para el análisis fue la Reacción en Cadena de la Polimerasa en tiempo real (qPCR), la cual demuestra la presencia del fragmento de 106pb del gen hly que codifica para listeriolisina O. Se cuantificó de forma absoluta el producto de la amplificación de ácido desoxirribonucleico (ADN) y se utilizó SYBER Green I, técnica basada en el principio de emisión de fluorescencia del marcador que se une a los productos de la PCR, los cuales se identifican en base a la curva de temperatura de fusión (Tm) generada. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: en yogures 4% y en salchichas el 9%, porcentajes relativamente altos considerando que son productos listos para la venta y de consumo masivo. Por tanto se sugiere la necesidad de implementar metodologías modernas que aseguren la ausencia de este microorganismo durante la fabricación de alimentos. La qPCR demostró ser una alternativa complementaria al cultivo ya que además de ser un método sencillo, genera resultados rápidos, que podrían emplearse para el análisis de rutina en los laboratorios de la industria de alimentos al incrementar el número de muestras examinadas optimizando así procesos de inspección y acción de los equipos de vigilancia en salud.
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“Evaluación del efecto antibiótico de los extractos acuosos de Allium sativum (ajo) y de Coriandrum sativum (culantro) mediante el método de sensibilidad por difusión en agar Bauer-Kirby, sobre cepas bacterianas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella entérica serovar typhi y Salmonella entérica serovar choleraesuis; en comparación con los antibióticos gentamicina y ampicilina
(PUCE - Quito, 2015) Yaguana Jiménez, César Sebastián; Granda Moreno, Elena Isabel
En el presente estudio, el efecto antibiótico de extractos acuosos de Allium sativum (ajo), y Coriandrum sativum (cilantro), en 3 concentraciones diferentes (250 mg / ml, 100 mg / ml y 62 mg / ml), bajo diferentes condiciones de temperatura, se evaluó, en comparación con el gentamicina y ampicilina antibióticos contra ATCC cepas bacterianas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella entérica serovar typhi y Salmonella entérica serovar choleraesuis. También se evaluó el posible uso de los extractos naturales como desinfectantes en alimentos sin procesos previos de cocción (ensaladas). Los extractos fueron sometidos a 35°C, 50°C y 90°C durante 10 minutos. El extracto de culantro, en las condiciones en que se realizó la prueba, no mostró efecto antibiótico contra ninguno de los microorganismos utilizados en la investigación. El extracto acuoso de ajo mostró baja actividad antibiótica ante cepas de Salmonella enterica serovar choleraseuis ATCC 7001, Salmonella enterica serovar typhi, Escherichia coli ATCC 25922 y Escherichia coli productora de BLEE. El extracto de ajo mostró una actividad antimicrobiana significativa frente a las cepas bacterianas de Staphylococcus aureus (MRSA) y Staphylococcus aureus ATCC 25923. El estudio muestra que, para obtener diámetros de halos de inhibición similares a los obtenidos con el antibiótico gentamicina, se debe utilizar concentraciones del extracto superiores 250 mg/mL. El estudio demuestra también que la mayor actividad antibiótica se produce cuando el extracto de ajo es sometido a una temperatura de 35°C durante 10 minutos. Posteriormente, el extracto de ajo, en concentración de 100 mg/mL fue puesto en contacto con muestras de alimentos (ensaladas) por período de 15 minutos. Después se realizó un análisis microbiológico de las muestras de alimentos en placas Petrifilm ®, antes y después del contacto con el extracto de ajo. Una vez realizados los contajes se observó que el extracto de ajo fue capaz de disminuir el número de colonias de microorganismos mesófilos aerobios y también de mohos y levaduras, lo que demuestra que estos microorganismos son sensibles al extracto acuoso de ajo
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Evaluación microbiológica de la presencia de hongos en ambientes de la Escuela de Bioanálisis de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador mediante la aspiración de volumen de aire en tiempo definido como una de las causas del Síndrome del Edificio Enfermo durante el 2011.
(PUCE - Quito, 2012) Rivadeneira Calvache, Daniela Alexandra; Granda Moreno, Elena Isabel
La presencia de esporas y estructuras fúngicas, diseminadas en el aire de ambientes internos pueden ser inhaladas en varias concentraciones, constituyendo una fuente de contaminación, que puede provocar alergias, asma, rinitis, bronquitis crónica, hasta alteraciones físicas y mentales como estrés e incomodidad que influyen en el rendimiento laboral. La Escuela de Bioanálisis, funciona en dos edificios: Edificio de Ciencias Exactas y Naturales y Edificio de Microbiología, en los que se encuentran distribuidos: oficinas, aulas, baños, auditorios y laboratorios. Estos espacios han perdido modernidad y a ello se suman factores como humedad, falta de ventilación, temperatura inadecuada, iluminación deficiente que posibilitan la presencia de hongos y el desarrollo del Síndrome del Edificio Enfermo. La metodología aplicada para el muestreo de aire fue la de captación por impacto activo y con la cual se obtuvieron 59 muestras de los 31 lugares analizados. Se identificaron 22 géneros de hongos mediante el cultivo en el laboratorio, siendo el Cladosporium spp., con un 90,32% el género más contaminante, seguido de Penicillium spp., con un 64,52%, luego el Rhizopus spp., y el Helminthosporium spp., con un 32,3% respectivamente, en los ambientes analizados de los dos edificios. Para el cultivo de los hongos se utilizo dos medios, el Agar Papa Dextrosa y el Agar Rosa de Bengala, resultando este último más selectivo y de gran utilidad en el recuento e identificación de estos microorganismos.
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Verificacion del proceso de limpieza y desinfección de superficies en cafeterías mediante métodos microbiológicos y de Bioluminiscencia de ATP
(PUCE - Quito, 2012) Lara Galarza, Pedro Sebastián; Granda Moreno, Elena Isabel
El presente estudio se realizó con la finalidad de verificar el procedimiento de limpieza y desinfección de las superficies en contacto con los alimentos de las cafeterías de un centro universitario de la ciudad de Quito administrado por la Empresa de Servicios Hoteleros y de Alimentos y Bebidas “XSERSA”. Se efectuó el muestreo de 200 superficies en 2 cafeterías antes y después del proceso de limpieza y desinfección, mediante la técnica de bioluminiscencia de ATP con equipos de la compañía 3M: luminómetro portátil UNI-LITE NG y los hisopos CLEAN TRACE. Las superficies muestreadas se distribuyeron de la siguiente manera: 50 del área de despacho de almuerzos de la cafetería 1, 50 del área de preparación de ensaladas frías de la cafetería 1, 50 del área de despacho de desayunos y almuerzos de la cafetería 2 y 50 del área de preparación de sanduches de la cafetería 2. De las superficies que se encontraron fuera del parámetro aceptable de la técnica de bioluminiscencia (≤ 300 URL), se realizó la siembra en procura de mesófilos aerobios con el objetivo de comprobar si esas superficies presentaban contaminación con microorganismos, con materia orgánica o ambos. Analizando los resultados se encontró que el 80% de las superficies no fueron aptas para producir o despachar alimentos porque estuvieron fuera de los parámetros aceptables y por consiguiente contaminados, y solo el 20% fueron aptas para preparar o despachar alimentos. Del total de superficies contaminadas o sucias el 26% correspondió a contaminación por mesófilos aerobios y el 74% fue por causa de materia orgánica. Finalmente, se procedió a realizar una capacitación a todo el personal de la empresa sobre la limpieza y desinfección y la importancia de establecer procedimientos operativos estandarizados de saneamiento (POES) para la implementación a futuro de un sistema de aseguramiento de la calidad.

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