Tesis - Microbiología (Sin Restricción)
Permanent URI for this collection
Browse
Browsing Tesis - Microbiología (Sin Restricción) by Author "*Santacruz Flores, Fernando René"
Now showing 1 - 3 of 3
Results Per Page
Sort Options
Item Open Access Caracterización de la dinámica de señalización de PhrA en Bacillus subtilis mediante la utilización de biosensores tipo FRET(PUCE - Quito, 2018-03-21) Naranjo Meneses, Pablo Leonardo; *Santacruz Flores, Fernando RenéEl género Bacillus comprende algunos microorganismos de importancia clínica e industrial que exhiben la capacidad de producir esporas en condiciones de estrés. El proceso de esporulación demanda un alto gasto energético por lo que es regulado cuidadosamente. En B. subtilis, este proceso está coordinado por la fosfotransferencia KinA-Spo0F-Spo0BSpo0A y el sistema de percepción de cuórum RapA-PhrA. A pesar del amplio conocimiento de ambas rutas, aún existen características no descritas que pueden contribuir al desarrollo de nuevas técnicas de control de la esporulación. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la señalización de PhrA mediante la utilización de biosensores tipo FRET. Para ello, se probó la sensibilidad y especificidad del biosensor mediante experimentos de FRETfotoblanqueo. Se realizaron ensayos de esporulación con B. subtilis y B. amyloliquefaciens, y se monitoreó la producción de PhrA con el biosensor. Más tarde, se elaboró un modelo de respuesta FRET con la finalidad de implementar el biosensor como una herramienta cuantitativa. Por último, se diseñaron varios mutantes de B. subtilis con alteración en el estado de fosforilación de Spo0F. El biosensor demostró sensibilidad a concentraciones nanomolares y alta especificidad a PhrA. La cepa B. subtilis PhrA-deficiente fue incapaz de esporular. La producción de PhrA en la cepa silvestre de B. subtilis cesó posterior a las tres horas de iniciado el proceso de esporulación. Interesantemente, B. amyloliquefaciens mantuvo la síntesis de PhrA después de la tercera hora y exhibió una eficiencia de esporulación del 100 %. La parametrización del modelo permitió cuantificar PhrA en los sobrenadantes de cultivos esporulantes. Todas los mutantes de las quinasas mostraron la misma eficiencia FRET que la cepa silvestre. En base a los resultados se pudo concluir que el biosensor presenta alta sensibilidad, especificidad y puede utilizarse como una herramienta cuantitativa. PhrA resulta esencial para iniciar el proceso de esporulación e influye en la eficiencia de este proceso. La velocidad de internalización de PhrA depende de la concentración de péptidos competidores, no obstante, no existe competición a nivel de receptor de RapA para PhrA. Por último, la interacción PhrA-RapA-Spo0F es independiente del estado de fosforilación de Spo0F.Item Open Access Detección de Cronobacter spp. en especias a granel en polvo de tres mercados de Quito(PUCE - Quito, 2021-03-02) Barriga Bermeo, Nicol Carolina; *Santacruz Flores, Fernando RenéLas especias son ingredientes imprescindibles en la gastronomía del Ecuador, se caracterizan por mejorar el sabor, el olor y el color de las comidas; sin embargo, pueden presentar contaminación por microorganismos patógenos. El objetivo del estudio fue determinar la presencia de Cronobacter spp. en especias expendidas en tres mercados de Quito para una futura prevención de enfermedades transmitidas por alimentos. Se empleó la metodología microbiológica basada en la ISO 22964:2017 para la detección de esta bacteria y se utilizó el CLSI 2019 para la prueba de susceptibilidad antimicrobiana. De acuerdo con los resultados obtenidos el 80 % de las especias contenían este microorganismo con mayor presencia en pimienta negra y comino, al contrario del achiote y canela. La metodología microbiológica identificó 16 cepas de C. sakazakii y una C. dublinensis; esta técnica presentó sensibilidad (50 %) y especificidad baja (33,33 %). Las cepas de C. sakazakii mostraron sensibilidad antibiótica a todos los fármacos empleados. La investigación concluye que C. sakazakii está presente en especias como un contaminante que representaría un riesgo para la inocuidad alimentaria en Quito, este patógeno emergente puede ocasionar enfermedades infecciosas, por lo que su identificación y tratamiento oportuno es primordial.Item Open Access Optimización de condiciones abióticas para la mayor producción de exopolisacáridos de bacterias del grupo Rizobio aisladas de suelo contaminado con hidrocarburos(PUCE - Quito, 2020-10-23) Zaldumbide Segovia, Katherine Alexandra; *Santacruz Flores, Fernando RenéLos rizobios son un grupo de bacterias Gram negativas de vida libre que se encuentra de forma prominente en la rizósfera al igual que en suelos contaminados. Se destaca por formar asociaciones simbióticas con plantas leguminosas, usándolas como su nicho ecológico. Esta bacteria produce una variedad de metabolitos secundarios, entre ellos, se encuentran los exopolisacáridos (EPS) que cuentan con potencial biorremediador en suelos contaminados con hidrocarburos. En este contexto, la presente investigación evaluó la capacidad de varios aislados de bacterias rizobios para producir EPS. Para esto, se recuperaron microorganismos a partir de suelo contaminado con hidrocarburos, a nivel de laboratorio, que dio como resultado once aislados, con los que se probó la mejor producción de EPS obteniéndose tres: R020801, R021102 y R021202. Posteriormente, se probó la producción del metabolito secundario bajo variación de condiciones de crecimiento, modificando en el medio de cultivo factores como: fuentes de carbono, fuentes de nitrógeno y pH; de forma individual y en conjunto. En este sentido, se demostró que, la producción de exopolisacáridos aumenta cuando uno o varios factores abióticos de crecimiento se han modificado. Además, se determinó que la modificación de factores abióticos y bióticos en conjunto, para las cepas ensayadas, aumentaron significativamente la producción de EPS frente a condiciones abióticas y bióticas en las que la bacteria crece de forma normal.