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Actualización de pruebas de laboratorio microbiológicas para el control de calidad en alimentos
(PUCE - Quito, 2015) Gamboa Terán, Mónica del Carmen; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
Toda empresa alimenticia frente a la necesidad de entregar productos de calidad, cuenta con laboratorios de control que permiten valorar las características físicas, organolépticas, composición y carga microbiana de sus productos finales. De esta manera, cada país cuenta con una normativa para establecer los protocolos de todas las pruebas de laboratorio, que de forma certera permitan poner en el mercado alimentos no solo con las características organolépticas esperadas sino también certificar que estos productos sean seguros para el consumo humano. El objetivo de un análisis microbiológico en la industrial de alimentos, es valorar la carga microbiana de cada producto, mediante un proceso analítico que resulte eficiente. La eficiencia en este caso se ve determinada por la obtención de resultados confiables, seguros, rápidos y sin dejar a un lado el costo y disponibilidad de las pruebas. Este trabajo ha realizado una revisión de los métodos de laboratorio utilizados en la industria alimenticia para el control de calidad microbiológico. Debido a que cada alimento cuenta con una distribución desigual de los microorganismos, las pruebas microbiológicas y los parámetros de los resultados dependerán del alimento que se esté analizando. Sin embargo de esto, existen pruebas básicas en el control de alimentos. Estas pruebas analizan microorganismos marcadores, que permiten determinar la calidad microbiológica de los alimentos procesados. La investigación realizada se concentra básicamente en la Normativa, en el caso de nuestro país, INEN para los recuentos de los microorganismos mencionados. Los resultados de este análisis han determinado que las técnicas convencionales establecidas por la normativa INEN se mantienen vigentes. En la actualidad existen además de los procedimientos convencionales, varias pruebas rápidas utilizadas en el control de alimentos. Sin embargo de ello, a pesar de que las pruebas arrojan resultados de manera rápida y eficiente, tiene poca difusión y uso. Actualmente y en su mayoría, los laboratorios de control de calidad de las empresas alimenticias utilizan los métodos tradicionales de recuentos totales, mohos y levaduras, coliformes y E.coli. Las pruebas microbiológicas rápidas (como Petrifilm), son utilizadas para situaciones emergentes que determinen la necesidad de resultados emergentes. Esta realidad no necesariamente se la debe relacionar con el costo de la prueba; muchas veces los técnicos de laboratorio se mantienen con protocolos convencionales debido a que simplemente funcionan bien.
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Antagonismo de aislados bacterianos procedentes de la Cueva de los Tayos frente a Botrytis cinerea y Fusarium oxysporum
(PUCE - Quito, 2020) Suárez Lozada, Josselyn Viviana; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
La Cueva de los Tayos se encuentra ubicada al sureste del Ecuador, en la provincia de Morona Santiago. Su acceso es limitado por diversos factores que se establecen en la zona, de manera que se dificulta la investigación científica. En noviembre de 2018, el Laboratorio de Microbiología de la Escuela de Ciencias Biológicas de la PUCE, formó parte de una expedición exploratoria a esta cueva, liderada por el M. Sc. Santiago Burneo, en la que se colectaron muestras de suelo, agua, ambiente y pared con la finalidad de identificar la diversidad microbiana presente en la Cueva y los potenciales usos biológicos de los microorganismos encontrados. Se identificaron 37 aislados bacterianos a través de Matrix-assisted laser desorption-ionization-time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF). Fueron seleccionadas cuatro bacterias con potencial actividad antifúngica: Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Lysinibacillus fusiformis y Breviacillus parabrevis. Se realizaron ensayos de antagonismo microbiano basados en la capacidad inhibitoria de los aislados bacteriano frente al crecimiento fúngico de dos hongos fitopatógenos: Botrytis cinerea y Fusarium oxysporum en tres temperaturas: 21 °C, 25 °C y 28 °C; considerando el rango de temperaturas óptimas de los organismos analizados. Se encontró que Bacillus pumilus, Bacillus licheniformis y Brevibacillus parabrevis presentaron antagonismo medio y antagonismo positivo con Botrytis cinerea, a las tres temperaturas a excepción de Bacillus pumilus, ya que, solamente presentó antagonismo positivo a 25 °C y a 28 °C. Por otro lado, se obtuvo que Bacillus licheniformis y Brevibacillus parabrevis presentaron antagonismo medio para Fusarium oxysporum a 21 °C y 25 °C, respectivamente. Finalmente, Lysinibacillus fusiformis se caracterizó por ser un antagonista negativo con porcentaje de inhibición menor al 10% para Botrytis cinerea a las tres temperaturas, mientras que para Fusarium oxysporum fue una antagonista bajo a 21 °C y 25 °C, y un antagonista negativo a 28 °C. Se concluye que Bacillus pumilus, Bacillus licheniformis y Brevibacillus parabrevis son efectivas controlando a Botrytis cinerea y con respecto a Fusarium oxysporum, se observó que Bacillus licheniformis y Brevibacillus parabrevis son eficientes para el control de este hongo. Por último, se reportó que Lysinibacillus fusiformis no tuvo efecto antagónico eficiente contra los dos hongos.
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Caracterización de genes de resistencia en enterobacterias aisladas de bacteriemias
(PUCE - Quito, 2016) Cadena Vizuete, María Fernanda; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
Las cepas resistentes a la terapia antibiótica convencional (β-lactámicos, aminoglucósidos y quinolonas) son una importante amenaza para la salud pública en el mundo. La rápida evolución y propagación de la resistencia se facilita enormemente por la presencia de elementos genéticos que codifican esta resistencia como los integrones de clase 1. Una de las infecciones más graves provocadas por estas bacterias es la bacteriemia, que es la presencia de bacterias en el torrente sanguíneo. Por lo tanto, en este estudio se caracterizaron genes de resistencia a β-lactámicos, aminoglucósidos y quinolonas y la presencia de integrones clase 1. Se colectaron quinientas setenta y dos muestras de las cuales 24 fueron aislados de hemocultivos. Se obtuvieron 19 E. coli, 3 K. pneumoniae, 1 S. marcescens y 1 E. cloacae. Para los genes de resistencia a β-lactámicos, el gen blaCTX-M fue el predominante presente en 9 aislados (37.5%), blaTEM se detectó en 7 aislados (29.2%) y el gen blaSHV en 3 aislados (12.5%). Sólo una cepa fue positiva para blaKPC, y para todos los genes de tipo BLEE. Para los genes de resistencia a quinolonas, el gen gyrB se encontró en todos los aislados (100%), seguido de parC en 22 aislados (91.7%) y qnrB sólo presente en 4 aislados (16.7%). En cuanto a aminoglucósidos, el gen aac(3´) fue el de mayor incidencia en 9 aislados (37.5%), seguido por aac(6´) en 6 aislados (25%) y ant(2´´) solo presente en 4 aislados (16.7%). También se determinó la presencia de la región variable de integrones clase 1 en 5 aislados. Nuestro estudio demuestra que a pesar de que todos los aislados presentaban por lo menos un gen de resistencia, fenotípicamente se obtuvieron antibiotipos sensibles a la terapia antibiótica.
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Caracterización molecular de genes de resistencia a β-lactámicos en aislados clínicos de Escherichia coli provenientes de urocultivos y pruebas de inhibición con péptidos de Boana rosenbergi y Rana sp.
(PUCE - Quito, 2017) Díaz Escobar, Víctor Daniel; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
Escherichia coli productora de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) es un agente microbiano involucrado en la mayoría de infecciones del tracto urinario (85%), debido a las escasas alternativas terapéuticas disponibles y a su rápida adquisición de genes de resistencia a diversos antibióticos. El objetivo de este estudio fue caracterizar la presencia de alelos que confieren resistencia a antibióticos β-lactámicos en muestras clínicas de Escherichia coli provenientes de urocultivos y probar la eficacia de los péptidos de la piel de anuros de las especies Boana rosenbergi y Rana sp. sobre este patógeno. El estudio se realizó en 70 aislados de E. coli obtenidos de muestras de orina de pacientes de un hospital en Quito, identificados por matrix assisted laser disorption/ionization – time of flight mass spectrometry. El análisis de sensibilidad fue realizado en los Laboratorios Zurita & Zurita por VITEK® 2. Se extrajo ADN con el kit Wizard® Genomic DNA Purification para bacterias Gram-negativas. La amplificación de los genes blaCTX-M-1, blaCTX-M-15, blaSHV y blaTEM se realizó con primers específicos. La presencia o ausencia de estos genes fue analizada por electroforesis en gel de agarosa al 1%. Los productos de PCR con concentración de 10 ng/μl, se enviaron a MacroGen para su secuenciación. El análisis se realizó con el software Geneous versión 7.0. Finalmente, con 10 aislados de E. coli BLEE se realizó microdilución en caldo con las secreciones de B. rosenbergi y Rana sp. Como resultados se obtuvo que de los 70 aislados: 54/70 provienen de mujeres (77,1%) y 16/70 de hombres (22,9%), donde 46/70 (65,7%) se originaron de consulta externa y 39/70 (55,7%) tuvieron fenotipo BLEE positivo; 32/70 (45,7%) poseían el alelo CTX-M-15; 3/70 el gen blaSHV; 19/70 el gen blaTEM, estas sin fenotipo BLEE, resistentes a ampicilina y con los alelos TEM-1 (18/19) y TEM-214; En cuanto a los péptidos, no hubo inhibición bacteriana por las secreciones de B. rosenbergi. Para las secreciones de Rana sp. hubo inhibición bacteriana con concentración mínima inhibitoria (CMI) al 90 y 50% de las cepas de: CMI90 de 500 μg/ml y CMI50 de 250 μg/ml. Como conclusión se puede decir con seguridad que las secreciones de Rana sp. son un recurso disponible que puede ser explotado como alternativa para el tratamiento de E. coli resistente a β-lactámicos de amplio espectro.
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Detección de genes productores de biofilm en aislados de Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis provenientes de Hospitales de Quito y Puyo
(PUCE - Quito, 2020) Sanguano Mantilla, Andrés Santiago; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
Staphylococcus aureus es considerado uno de los principales patógenos responsables de las infecciones comunitarias y relacionadas con el cuidado de la salud. La terapia de las infecciones estafilocócicas enfrenta muchas dificultades, no solo por la resistencia de la bacteria a los antibióticos y la multiplicidad de factores de virulencia que produce, sino también por su capacidad para formar biofilm. Del mismo modo, las infecciones causadas por Staphylococcus epidermidis en los hospitales son cada vez más frecuentes, sobre todo en contaminación de instrumentos quirúrgicos y en pacientes con el sistema inmune comprometido. El biofilm es producido por el locus ica que cuenta con cuatro genes icaA, icaB, icaC e icaD. El objetivo del estudio fue detectar la presencia de los genes ica, responsables de la producción de biofilm, en aislados clínicos de Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se analizaron 99 asilados clínicos de S. aureus y S. epidermidis provenientes de dos hospitales de tercer nivel en las ciudades de Quito y el Puyo, y una cepa control American Type Culture Collection de S. aureus ATCC® 25923. Las bacterias formaron parte de la Colección Bacteriana Quito Católica (CB-QCA). Los aislados fueron cultivados en manitol salado y al día siguiente en agar rojo Congo (CRA), para determinar su capacidad de producir biofilm. Fueron identificados seis fenotipos siguiendo la escala colorimétrica patrón: muy rojo 11/100, rojo 35/100, rojo obscuro 25/100, casi negro 3/100, negro con 16/100 y muy negro 10/100. Se identificó la presencia de los genes del locus ica en cada bacteria y se obtuvo un 70,0% positivos para icaA, 35% positivos para icaB, 26,0% positivos para icaC y 66,0% positivos para icaD a través de PCR con cebadores específicos para cada gen. Al comparar los resultados del CRA con la confirmación con PCR, se observó que la técnica de agar rojo Congo no es 100% efectiva para determinar si los aislados son capaces de producir biofilm, ya que se identificaron aislados que presentaron los fenotipos negativos para la producción de biofilm (muy rojo, rojo y rojo obscuro) pero tenían uno o más de los genes ica.
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Detección de genes productores de enzimas modificadoras de aminoglucócidos (EMAs) en aislados hospitalarios de Pseudomonas aeruginosa
(PUCE - Quito, 2010) Barba Estrella, Pedro Miguel; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
La resistencia bacteriana a antibióticos representa un problema de salud pública de rápido crecimiento, ocasionado, entre otras causas, por el inadecuado uso de antimicrobianos y la rápida dispersión de genes de resistencia. Pseudomonas aeruginosa tiene gran relevancia debido a su alta incidencia en infecciones nosocomiales y al surgimiento de cepas multiresistentes. Los aminoglucósidos representan un grupo de antimicrobianos fundamental en la terapia de infecciones cuyo agente etiológico es Pseudomonas aeruginosa. El objetivo de este estudio fue detectar la presencia / ausencia de genes que codifican enzimas modificadoras de aminoglucósidos (EMAs) en aislados hospitalarios de Pseudomonas aeruginosa.
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Detección de genes que codifican la resistencia a carbapenemes (tipo Serin-B-lactamasas) en Pseudomonas aeruginosa
(PUCE - Quito, 2011) Ayala Sánchez, Sofía Cristina; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
Pseudomonas aeruginosa es un importante patógeno oportunista. Se encuentra ampliamente distribuida, y en la actualidad es responsable de un gran número de infecciones, principalmente en ambientes hospitalarios (Cantón et al., 2002). Su amplia distribución se debe a que esta bacteria requiere de una mínima concentración de nutrientes para alcanzar un crecimiento óptimo, por lo que cualquier ambiente húmedo representa un ecosistema propicio para su colonización (Waterer y Wunderink, 2003).
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Detección de mutaciones puntuales en aislados clínicos de Escherichia coli resistentes a fluoroquinolonas
(PUCE - Quito, 2017) Quelal Madrid, Francisco Antonio; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
Una infección de tracto urinario es la invasión de un agente patógeno en el sistema urogenital. Esta constituye la segunda infección más frecuente mundialmente, solo superada por infecciones gastrointestinales. La mayoría de los casos se presentan como una inflamación en las zonas afectadas; aunque existen casos de pacientes asintomáticos. El 95,00% de las infecciones son por Escherichia coli y el 5,00% restante por Klebsiella, Proteus mirabilis y Acinetobacter baumanii. El tratamiento para controlar las infecciones de tracto urinario son las fluoroquinolonas. Su extendido uso ha generado la aparición de variantes resistentes a la terapia con fluoroquinolonas. El objetivo del estudio fue identificar las mutaciones puntuales en genes en la Región Determinante de Resistencia a Quinolonas (QRDR) en aislados de E. coli resistente a fluoroquinolonas obtenidas de muestras de orina, en un hospital de Quito. Se colectaron 307 aislados, y se seleccionaron 72 E. coli que fueron identificadas por pruebas bioquímicas y MALDI-TOF. El perfil de sensibilidad fue realizado con el sistema VITEK 2™. La extracción de ADN se realizó siguiendo las especificaciones del kit Wizard™ Genomic DNA Purification de Promega ®. La amplificación de la región QRDR de los genes gyrA, gyrB, parC y parE se realizó con iniciadores específicos y su identificación fue por electroforesis en gel de agarosa al 1%. Los productos de PCR fueron purificados mediante el kit de Invitrogen™, secuenciados por la empresa MACROGEN Inc., y las secuencias analizadas con el software GENEIOUS 5.6.7. De los 72 aislados el 77,78% provenían de mujeres y 22,22% de hombres. El análisis por VITEK 2™ reveló que 58,33% muestras de E. coli presentaron el fenotipo BLEE, el 100,00% fueron resistentes a ciprofloxacina y 93,06% a levofloxacina. El análisis de secuencias reveló una mayor acumulación de mutaciones en el gen parC. En parE se encontró que el 44,44% eran fenotipo silvestre. En el gen gyrA se observaron solo mutaciones ya reportadas anteriormente; en gyrB solo el 15,28% presentaron mutaciones. El estudio permite entender cómo se desarrolla esta resistencia en la población local y reportar la resistencia a fluoroquinolonas encontrada en un hospital de tercer nivel de la ciudad de Quito.
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Determinación de variantes genéticas de enzimas betalactamasas procedentes de cepas bacterianas aisladas de centros hospitalarios en Quito
(PUCE - Quito, 2014) León Cadena, Andrea Lucía; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
El aumento de la prevalencia de las enzimas betalactamasas de espectro extendido (BLEE) tipo CTX-M, en bacterias entéricas de origen hospitalario y comunitario, ha tenido una gran repercusión a nivel mundial y en particular en América Latina durante los últimos diez años. Con el fin de proporcionar información relevante al problema creciente de la resistencia bacteriana, el objetivo del presente estudio fue determinar las variantes genéticas en aislados bacterianos que codifican para enzimas betalactamasas procedentes de aislados clínicos de centros hospitalarios en Quito. Se analizaron 110 aislados clínicos en los cuales se establecieron las variantes genéticas tipo blaCTX-M. El análisis fue realizado a través de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y mediante cebadores específicos, se amplificaron las variantes tipo blaCTX-M que portaban cada uno de los aislados. Los genes fueron visualizados en geles de agarosa y luego del secuenciamiento, en Macrogen - Korea, se encontraron las siguientes variantes alélicas: CTX-M-28 (66,4 %), CTX-M-2 (13,6 %), CTX-M-12 (8,0 %) y CTX-M-14 (6,4 %) donde Escherichia coli fue la Enterobacteria más prevalente (50,9 %) y cuyos aislados provenían en su mayoría de muestras de orina. A pesar de que en América Latina se han realizado varios estudios sobre estas enzimas, estos datos representan los primeros reportes en Ecuador para dichos alelos. De esta forma se ha contribuido con información que puede ser usada en estudios de epidemiología molecular tanto a nivel local como regional.
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Dos años de vigilancia de la dinámica Clonal de Staphylococcus Aureus resistentes a meticilina aislados en un hospital de tercer nivel en Quito-Ecuador
(PUCE - Quito, 2015) Loaiza Conza, Karen Adriana; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
El objetivo del presente estudio fue vigilar la dinámica clonal de dos años de aislados de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (SARM) en un hospital ecuatoriano de tercer nivel a través de un estudio con muestras colectadas desde Abril 2009 a Diciembre 2010. El genotipaje fue realizado con Multi-Locus Variable- Number Tandem-Repeat Analysis (MLVA), el tipaje con Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec), y los genes (lukS/F-PV) de PVL (Panton Valentine Leukocidin) fueron detectados. A partir de 82 pacientes con infecciones por SARM, se analizaron 93 aislamientos. En general, al referirnos a los porcentajes más altos: 68 (73,1%) fueron USA300 (ST8) y variantes, 72 (77,4%) albergaron SCCmec atípicos, y 59 (63,4%) presentaron genes para PVL, incluyendo 44 (71,0%) de los 62 casos de infecciones en piel y tejidos blandos. Fenotípicamente, 30 (44,1%) de 68 aislados ST8 fueron sensibles a todos los antibióticos probados, exceptuando cefoxitina. Todos los 93 aislamientos fueron resistentes a cefoxitina y no se encontró niveles de resistencia para vancomicina o linezolid. La epidemiologia molecular revelo que los aislados ecuatorianos pertenecían a 2 grandes complejos clonales: CC8 y CC5. Con 22 de 31 genotipos representando al ST8, el CC8 es la población predominante en Ecuador. Sin embargo, la dinámica clonal no fue simple. El clon USA300 (ST8) y variantes circularon continuamente durante el período de 21 meses pero otros clones como el Brasileño (ST239), USA800/pediátrico (ST5), Ibérico (ST247), SLV de ST239 (ST241), Coreano (ST72) y Alemán del sur/Italiano (ST228) también estuvieron en circulación. La circulación esporádica de diferentes ST sugiere una alta diversidad de linajes junto con transferencia horizontal de genes apoyada por la variedad encontrada en el SCCmec. Los autores creen que el surgimiento y la sustitución clonal de SARM están sucediendo más frecuentemente de lo que se había pensado anteriormente. Los resultados de este estudio complementan la investigación epidemiológica en la región dado que este estudio es el primer paso en la elucidación de las cepas de SARM predominantes de Ecuador y perfiles de resistencia.
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Estudio de la resistencia a antimicrobianos en enterobacterias
(PUCE - Quito, 2025) Achig Catota, Ricardo Gabriel; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
El presente trabajo aborda el estudio de las enterobacterias, una familia de bacterias Gramnegativas de gran relevancia clínica y epidemiológica. Se analizan sus características microbiológicas, mecanismos de patogenicidad y, especialmente, los crecientes desafíos que representa su resistencia a los antimicrobianos. Se revisan los principales géneros implicados en infecciones humanas, como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella spp., Shigella spp. Y otros oportunistas como Proteus, Morganella y Serratia. Se profundiza en los mecanismos bioquímicos de resistencia, incluyendo la producción de betalactamasas de espectro extendido (BLEE), carbapenemasas (KPC, NDM), resistencia fluoroquinolonas, colistina y la diseminación de genes a través de plásmidos, transposones e integrones. El trabajo presenta datos de resistencia a antimicrobianos presencia de genes de resistencia y datos epidemiológicos de Ecuador, destacando una alta prevalencia de cepas multirresistentes en hospitales de Quito. Se discuten estrategias de control y manejo, como los Programas de Optimización de Antimicrobianos (PROA), el diagnóstico rápido, nuevas terapias combinadas como ceftazidima avibactam, cefiderocol, y medidas de prevención hospitalaria. El trabajo concluye enfatizando la necesidad de un enfoque integral basado en vigilancia microbiológica, uso racional de antibióticos y políticas sanitarias que aborden el problema desde una perspectiva One Health.
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Incidencia del uso de antimicrobianos en la producción de alimentos para el consumo humano
(PUCE - Quito, 2016) Vivanco Freile, Mónica Patricia de las Mercedes; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
El uso de antibióticos como promotores de crecimiento en animales de crianza se ha convertido en un problema para la salud mundial. El consumo de antibióticos para mejorar el rendimiento en animales cuya carne y otros derivados están destinados a la alimentación humana resulta efectiva por cuanto, los antimicrobianos destruyen parte de la flora bacteriana normal del animal y permiten su engorde. Esta situación origina en el organismo animal una serie de eventos fisiológicos que se abordan también en el presente estudio. Sin embargo, quizás la situación más complicada y peligrosa se suscita al asociar el uso de los antibióticos con el desarrollo de bacterias resistentes que se pueden generar en el animal, pero que también pueden ser introducidas en el organismo humano por contaminación. Otro problema presente es la ingesta de residuos tóxicos con los alimentos producidos con antibióticos. En el presente trabajo se analizan brevemente los antibióticos, sus mecanismos de acción, las resistencias bacterianas, los medios de administración de antibióticos a los animales y los efectos a nivel fisiológico general y celular, así como las causas y consecuencias del uso sin control de antimicrobianos como promotores de crecimiento en la salud animal y especialmente humana. Se trata brevemente aspectos de regulaciones y normativas así como de las consecuencias de eliminar el uso de los antibióticos con el propósito expuesto.
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Mutaciones puntuales relacionadas con la resistencia en mycobacterium tuberculosis aisladas de un hospital de tercer nivel en ecuador: primer reporte del Genotipo Beijing
(PUCE - Quito, 2015) Espinel Díaz, Nathaly Monserrate; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
La tuberculosis es una de las enfermedades más prevalentes a nivel mundial. Es ocasionada por un complejo bacteriano conocido como complejo Mycobacterium tuberculosis (MTBC). A pesar de ser una enfermedad curable, con el desarrollo y dispersión de cepas resistentes a drogas se ha limitado la alterativa terapéutica. La identificación rápida y correcta de la resistencia a través del análisis de mutaciones puntuales implicadas en la resistencia a anti-tuberculosis es fundamental para prevenir el desarrollo y dispersión de cepas multirresistentes. Nuestro objetivo es caracterizar las mutaciones más frecuentes en genes relacionados con la resistencia a anti-tuberculosis y determinar el genotipo de MTBC que circula en nuestra región, apartando información para el control y prevención del desarrollo de cepas de MTBC resistentes a drogas. Métodos: Se analizaron 82 aislados de MTBC colectados de un hospital de tercer nivel en Quito-Ecuador. Se secuenció las regiones determinantes de la resistencia en los genes rpoB, katG, gyrA y rrs y las regiones promotoras inhA y eis. La identificación de sublinajes se realizó utilizando Repeticiones en Tándem de Número Variable de Unidades Repetitivas Intercaladas Micobacterianas (MIRU-VNTR). Resultados: Se registraron 48 aislados MDR, 14 aislados INH-monoresistentes, 5 aislados RIF-monoresistentes y 15 aislados sensibles a todas las drogas analizadas. 48 aislamientos RIF-resistentes muestran al menos una mutación en rpoB. La mutación Ser531Leu fue el más prevalente. 47 aislamientos resistentes a INH tenían una mutación en el gen katG y/o en el promotor inhA; la substitución Ser315Asn y [C (-15) T] fueron las mutaciones más prevalentes en katG y promotor inhA, respectivamente. Tres mutaciones encontradas en este estudio no se han registrado en la base de datos TB Drug Resistance Mutation: Met515Ile en rpoB [GenBank: KP732541]; Thr314Ala [GenBank: KP732540] y Thr324Ser en katG [GenBank: KP732539]. El análisis MIRU-VNTR reveló la presencia de LAM (17,1%), Ghana (15,9%), Haarlem (8,5%), tipo S (4,9%), Camerún (3,7%) y Beijing (1,2%). Conclusiones: Las mutaciones de resistencia más frecuentes fueron consistentes con los reportados para la región. Encontramos tres nuevas mutaciones no reportados en los genes rpoB y katG, que podrían estar relacionados con la resistencia a RIF e INH. Registramos el primer informe del genotipo Beijing en Ecuador.
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Resistencia a colistina en enterobacterias productoras de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) y carbapenemasas aisladas de animales de granja de la provincia de Imbabura
(PUCE - Quito, 2023) Vargas Calo, Wilson Paul; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
La resistencia antimicrobiana representa una amenaza mundial para la salud debido a la relación intrínseca que existe entre las bacterias, el ser humano, los animales y el medio ambiente. Antibióticos como los betalactámicos y las polimixinas desempeñan un papel fundamental en el tratamiento de infecciones multirresistentes, su uso constante e inadecuado induce una presión selectiva acelerada en los microorganismos permitiendo el desarrollo, adquisición y adaptación de varios mecanismos de resistencia que están mediados por la combinación de mutaciones cromosómicas y por transferencia horizontal de genes. La amplitud de estos mecanismos ha generado un nuevo dilema terapéutico relacionando el control y el manejo de las infecciones con la disponibilidad de antibióticos y metodologías utilizadas para la evaluación de la resistencia a múltiples fármacos. El objetivo de este estudio fue caracterizar de manera fenotípica y genotípica la producción de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) y carbapenemasas en aislados resistentes a colistina obtenidos a partir de animales de granjas de la provincia de Imbabura que forman parte de la Colección Bacteriana - Quito Católica (CB-QCA). Se seleccionaron treinta aislados de los cuales 18 correspondían a Proteus mirabilis, 11 fueron identificados como Escherichia coli y un aislado correspondía a Enterococcus faecalis. Fenotípicamente 14/30 (46,7%) aislados fueron productores de BLEE, 15/30 (50%) presentan perfiles de resistencia a carbapenémicos y 21/30 (70%) son resistentes a colistina. Se encontró que, 14/30 (46,7%) de los aislados son resistentes a tres o más familias de antibióticos. A nivel genotípico se detectaron genes de tipo blaCTX-M en 14/30 (46,7%) de los aislados, blaTEM en 10/30 (33,3 %), blaSHV en 8/30 (26,7%) y no se amplificaron los alelos de los genes mcr. Mediante Tipificación Multilocus de Secuencias (MLST) en Escherichia coli se encontraron 6 secuencias tipo (ST): ST90, ST101, ST624, ST1589, ST3596, ST3856 y 4 ST más aún sin reportar. Los resultados obtenidos confirman la prevalencia de aislados multirresistentes a nivel fenotípico además de la presencia de genes que confieren resistencia a antibióticos.
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Sensibilidad antimicrobiana y detección de genes de virulencia ipaH, ial, set1A, set1B y Stx en aislados clínicos de Shigella
(PUCE - Quito, 2011) Villacrés Granda, Irina Maribel; Alcocer Negrete, Iliana del Rocío
El género Shigella comprende bacilos de las especies S. flexneri, S. sonnei, S. boydii y S. dysenteriae, productores de disentería bacilar o shigelosis. La virulencia y patogenicidad del género se caracteriza por la presencia de una alta multirresistencia a antibióticos y variedad de factores de virulencia que permiten la infección al hospedero. El objetivo de este estudio fue establecer la sensibilidad antimicrobiana y detectar los genes de virulencia Invasion plasmid antigen H, ipaH; Invasion-associated locus”, ial; Shigella toxin” Stx; Shigella enterotoxin 1A”, set1A; y Shigella enterotoxin 1B”, set1B en aislados clínicos de Shigella spp.; para el efecto se analizaron 79 aislados obtenidos de Zurita & Zurita laboratorios y del Hospital Vozandes Quito. Mediante serotipaje, se obtuvieron 3 especies: S. flexneri (63,29%), S. sonnei (29,11%), y S. boydii (7,59%). La sensibilidad antimicrobiana se analizó siguiendo el método de Kirby- Bauer y las recomendaciones del Clinical and Laboratory Standars Institute”, CLSI. La resistencia obtenida fue a tetraciclina (96,20%), ampicilina (91,14%), trimetoprim/sulfametoxazol (86,08%) y cloranfenicol (84,81%). El análisis de presencia de genes de virulencia se realizó mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando iniciadores previamente descritos. Se determinó una alta prevalencia de los genes ipaH (91,14%) e ial (82,28%), los genes codificantes de enterotoxina 1 (set1A y set1B) se encontraron en un 34,18%. Los resultados obtenidos demuestran la existencia de una multirresistencia a antibióticos y cepas altamente virulentas...

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