Tesis - Microbiología (Sin Restricción)
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Browsing Tesis - Microbiología (Sin Restricción) by Author "*Yánez Altuna, Jeniffer Marcela"
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Item Open Access Acción in vitro de Trichoderma spp. y Bacillus spp. como controladores biológicos conjuntos contra Fusarium oxysporum en uvilla (Physalis peruviana), ecotipo colombiano, en la sierra norte y centro del Ecuador.(PUCE, 2018) Silva Guachamín, Alexander David; *Yánez Altuna, Jeniffer MarcelaLa uvilla (Physalis peruviana) ha logrado espacio en el mercado ecuatoriano, llegando a convertirse en la fuente principal de ingresos de muchas familias en la serranía. Uno de los principales problemas en la producción es el marchitamiento vascular, generado por el complejo fúngico del fitopatógeno Fusarium oxysporum. El control de esta enfermedad usando fungicidas es ineficaz y puede afectar la calidad del fruto. El objetivo de este estudio es el aislamiento, identificación morfológica, molecular y detección de actividad antagonista de Trichoderma spp. y Bacillus como alternativas biológicas conjuntas para controlar a Fusarium oxysporum en ensayos in vitro. Se muestrearon 12 localidades productoras de uvilla pertenecientes a las provincias de Pichincha, Tungurahua, Cotopaxi e Imbabura. Un total de 252 muestras de suelo fueron recolectadas y procesadas. Se obtuvieron 25 aislados de Trichoderma spp. y 36 de Bacillus spp. identificadas por su morfología macro y microscópica. Después de la extracción de ADN de los aislados, se realizó la PCR usando los primers ITS 1 y 4 para los hongos, y para las bacterias se utilizó los primers PA forward y PH reverse dirigidos al gen 16s rRNA. Por medio de un screening de antagonismo para Bacillus, se escogieron previamente 10 aislados, 6 con antagonismo medio y 4 con antagonismo positivo. Las cepas escogidas fueron identificadas molecularmente como Bacillus subtilis y Bacillus cereus. Mediante las pruebas de antagonismo individual de Trichoderma se eligieron 7 aislados de diferente especie con porcentajes de inhibición superior al 50%. Se probó la compatibilidad de los microorganismos elegidos de forma conjunta en platos Petri con PDA . Las cepas de Bacillus cereus presentaron compatibilidad mientras que las cepas de Bacillus subtilis no. En total se obtuvieron 14 combinaciones con Trichoderma. La compatibilidad y viabilidad de ambos microorganismos fue comprobada por medio de microscopia y siembra del crecimiento micelial. Las pruebas de antagonismo conjunto entre cepas compatibles de Bacillus spp. y Trichoderma spp contra Fusarium oxysporum presentaron porcentajes de inhibición superiores a los obtenidos de forma individual. Los resultados exitosos plantean nuevas pruebas conjuntas a nivel de invernadero y campo así como aplicaciones individuales de todos los microorganismos encontrados en este estudio por su destacable potencial antagonista.Item Open Access Caracterización morfológica y molecular de Alternaria alternata hongo fitopatógeno causante del secamiento descendente del cáliz, en frutos de Physalis peruviana en la Sierra centro-norte del Ecuador(PUCE, 2018) Bosquez Guerra, Carolina Lizeth; *Yánez Altuna, Jeniffer MarcelaLos cultivos de uvilla son una fuente importante de ingresos para la economía del Ecuador, sin embargo, estos se ven afectados por enfermedades de origen fúngico entre las que destacan el secamiento descendente del cáliz y fruto ocasionado por complejo Cladosporium sp y Alternaria sp¸ derivando en la pérdida total del fruto. El objetivo de este estudio fue la identificación morfológica y molecular del patógeno Alternaria spp aislado a partir de lesiones de frutos y capuchones. Se recolectaron 345 muestras de 14 localidades ubicadas en las provincias de Imbabura, Pichincha, Tungurahua y Cotopaxi. Todas las muestras fueron desinfectadas y sembradas en agar papa dextrosa (PDA) con gentamicina. Se incubó a temperatura ambiente por 7 días con observaciones diarias. Las colonias de hongos que presentaban la morfología macroscópica de Alternaria spp, fueron aisladas mediante subcultivos. Las características microscópicas de Alternaria spp fueron confirmadas mediante microscopía. A continuación, se realizó los Postulados de Koch en frutos de sanos de uvilla, que fueron incubados a temperatura ambiente de 7 a 10 días. La presencia de síntomas se registró a diario y una vez producida la lesión, los hongos se reaislaron. Para la identificación molecular de los aislados primarios y de los reaislados se realizó la extracción de ADN, PCR y secuenciación. Los amplicones obtenidos fueron enviados a Macrogen (Seúl-Corea del Sur), para su respectiva secuenciación. La herramienta BLAST del NCBI identificó al hongo fitopatógeno como Alternaria alternata. No se obtuvo aislados con características de ser Cladosporium sp Los resultados obtenidos muestran que A. alternata es capaz de desarrollar la enfermedad sin la presencia de Cladosporium sp.Item Open Access Detección de Fusarium oxysporum en cultivos de uvilla (Physalis peruviana L.) en la Sierra norte y centro del Ecuador(PUCE, 2018) Arellano Solórzano, Martín Josué; *Yánez Altuna, Jeniffer MarcelaLa uvilla (Physalis peruviana) es un producto con emergente importancia económica para el Ecuador. Sin embargo, los estudios sobre patógenos que afectan a dicho cultivo en el país son contados. Por dicha razón, el presente estudio tiene como objetivo determinar la presencia de Fusarium oxysporum, causante de la marchitez vascular, en las provincias de la Sierra centro y norte del Ecuador, puesto que a futuro puede ser un gran problema fitosanitario como lo ha sido ya en países productores de uvilla. Para esto, se visitaron cultivos y se tomaron muestras de plantas que presentaban sintomatología similar al marchitamiento vascular. A partir de las muestras, se obtuvieron doce hongos con morfología similar a Fusarium, en medio de cultivo Agar Papa Dextrosa. Mediante la observación macro y microscópica de los hongos obtenidos, se realizó la identificación a nivel de género. Se extrajo el ADN de los aislados y se realizó PCR de cuatro genes: Espaciador Transcrito Interno (ITS), Citocromo Oxidasa 1 (COX1), Factor de Elongación - 1α (EF - 1α) y β - Tubulina para la identificación a nivel de especie. Los amplicones fueron secuenciados. Doce aislados fueron identificados como Fusarium oxysporum mediante BLAST. A los hongos se les realizaron cultivos monospóricos para posteriormente aplicar postulados de Koch en plántulas de uvillas libres de patógenos y de microorganismos benéficos para que no se vea afectado el experimento. Al cabo de tres semanas, se observaron los síntomas (amarillamiento y marchitamiento en hojas, reducción del tamaño de la planta, debilidad y necrosis del tallo). En total se recuperaron nueve aislados que provocaron marchitamiento vascular en las plántulas. Los postulados de Koch fueron completados con éxito, por lo tanto, se logró detectar por primera vez a F. oxysporum como el agente causal de la marchitez vascular en plantas de uvilla en la Sierra centro y norte del Ecuador.Item Open Access Evaluación in planta de la efectividad de cepas de Trichoderma spp. y Bacillus spp. como controladores biológicos de Fusarium oxysporum en uvilla (Physalis peruviana L.)(PUCE - Quito, 2021-04-06) Vera Mera, Johanna Lisseth; *Yánez Altuna, Jeniffer MarcelaLa uvilla (Physalis peruviana L.) es un fruto andino que ha logrado gran impacto económico en los últimos años, tanto por su alto contenido nutricional como por sus características organolépticas. Sin embargo, su cultivo se ha visto afectado por patógenos como Fusarium oxysporum, agente causal de la marchitez vascular. El presente estudio evaluó la eficacia biocontroladora in planta de cepas de Trichoderma spp. y Bacillus spp., contra F. oxysporum bajo condiciones de invernadero, como una alternativa al uso de agroquímicos. Para este propósito se seleccionaron cepas cuya compatibilidad en consorcio y efecto antagonista in vitro fue previamente descrita en otro estudio. Estas cepas fueron empleadas de forma individual y conjunta en plántulas de uvilla inoculadas con anterioridad con el fitopatógeno. Durante el periodo de observación, el proceso de infección se realizó dos veces a diferentes concentraciones y se determinó la capacidad de los microorganismos potencialmente biocontroladores para reducir la incidencia y severidad de la enfermedad. Entre los hallazgos del presente estudio se resalta el efecto de la inoculación de B. subtilis OJ1Aga que inhibió en un 100 % el desarrollo de marchitez vascular en las dos infecciones realizadas. Los resultados de esta investigación demuestran que los tratamientos conformados únicamente por cepas de Bacillus spp. presentaron mejor capacidad antagonista y acción biofertilizante al compararse con el efecto de los consorcios fúngicos y bacterianos o la inoculación individual de Trichoderma spp.Item Open Access Identificación de Colletotrichum spp. como agente causante de la antracnosis en hojas de uvilla (Physalis peruviana L.) en el centro de la región interandina del Ecuador(PUCE - Quito, 2021-01-26) Cajas Salazar, Anabeliza Katherin; *Yánez Altuna, Jeniffer MarcelaLa uvilla (Physalis peruviana L.) es una especie frutícola andina que por su alto valor nutricional y medicinal ha adquirido importancia económica en todo el mundo. Lamentablemente, la productividad y calidad del cultivo es afectado por agentes bióticos como: hongos, bacterias, nematodos y virus. La antracnosis es una enfermedad fúngica que lesiona las hojas de la uvilla y es objetivo de este estudio, identificar a Colletotrichum spp. como el agente causal de este problema en las provincias de Cotopaxi y Pichincha. Para esto, se colectó tejido foliar con manchas necróticas con anillos concéntricos y los aislados fúngicos obtenidos se caracterizaron fenotípicamente mediante descripción macroscópica y microscópica de la colonia. La identificación molecular se realizó mediante análisis de secuencias obtenidas con los primers ITS1/ITS4 que se compararon en bases de datos referenciales (GenBank, MycoBank, ISHAM, UNITE) y presentaron una similitud ≥ 97 % para C. gloeosporioides, C. fructicola, C. scovillei y C. coccodes. Finalmente, se confirmó mediante postulados de Koch que estas cepas causan síntomas de antracnosis en plantas de uvilla sanas, mediante el re-aislamiento y análisis morfológico y molecular de los hongos fitopatógenos que fueron idénticos a los originales. Es importante destacar que este es el primer reporte de un complejo de especies de Collectotrichum infectando cultivos de uvillas en Ecuador.Item Open Access Identificación serológica y molecular del virus del mosaico rugoso PVX en cultivos de Physalis peruviana de la Sierra centro norte del Ecuador(PUCE-Quito, 2019-06-10) Andrade Beltrán, Luis Fernando; *Yánez Altuna, Jeniffer MarcelaEn los últimos años la exportación de cultivos orgánicos se ha incrementado, entre ellos destaca la uvilla (Physalis peruviana), fruta apreciada en otros países por su sabor y su alto contenido de antioxidantes. Sin embargo, como todo cultivo es susceptible al ataque de patógenos. Las enfermedades ocasionadas por microorganismos, especialmente por virus son poco estudiadas en el país y la información es escasa. El presente estudio busca determinar la presencia del Potato virus X (PVX) o virus X de la papa, causante del mosaico rugoso en hojas de uvilla. Diez fincas fueron visitadas en la región sierra centro norte del país, donde se tomaron hojas que presentaban síntomas típicos de virosis, clorosis, mosaico y enrollamiento. Las hojas fueron transportadas al Laboratorio de Fitopatología de AGROCALIDAD en Tumbaco, para verificar la presencia del virus. Se realizó una detección serológica usando ImmunoStrip® y la prueba DAS-ELISA de la compañía Agdia®, las cuales fueron positivas para el virus en dos fincas. La técnica RT-qPCR, también confirmó la presencia del virus y al analizar la curva de fusión (melt) se identificaron dos variantes del virus. Los amplicones obtenidos fueron enviados a secuenciar y fueron identificados así también, como PVX. Finalmente, para verificar que el virus obtenido es el agente causal del mosaico rugoso en plantas de uvilla, se realizaron postulados de Koch. después de 15 días de la infección, síntomas similares aparecieron y mediante ensayos posteriores se demostró que PVX es el agente causal del mosaico rugoso en uvilla, siendo el primer registro en Ecuador.Item Open Access Optimización de la producción de esporas de Beauveria bassiana AgR F504 para el control de Plutella xylostella(PUCE - Quito, 2020-12-15) Vásquez Muñoz, Wilson Javier; *Yánez Altuna, Jeniffer MarcelaPlutella xylostella es una de las plagas cosmopolitas más destructivas del mundo, generando pérdidas de más de cuatro billones de dólares. Su control es difícil, por su capacidad de adaptación y resistencia a insecticidas. El manejo de esta plaga es de interés agrícola; durante los últimos años, el uso de hongos entomopatógenos ha presentado varias ventajas por los diferentes mecanismos que tienen para infectar a las larvas de los insectos. Beauveria bassiana, ha sido considerada uno de los mejores hongos entomopatógenos, y potenciar su cultivo masivo, se ha vuelto necesario para controlar esta plaga de manera adecuada. Este estudio tiene como objetivo evaluar la virulencia in-vitro de esporas de Beauveria bassiana AgR F504 para el control de Plutella xylostella y para esto se evaluó diferentes parámetros de virulencia de las esporas obtenidas en tres diferentes substratos: arroz, avena y medio de cultivo Sabouraud. Los criterios de virulencia evaluados fueron: germinación, mediante el conteo de esporas germinadas; el rendimiento, evaluando la cantidad de conidios por gramo producido; la capacidad enzimática, mediante espectrofotometría y la capacidad insecticida con la realización de un bioensayo con larvas del insecto. Los resultados que se obtuvieron variaron dependiendo del substrato donde creció el hongo, en el caso de la germinación, los mejores resultados lo obtuvieron el sustrato de avena y el medio Sabouraud. En el caso del rendimiento del hongo, fue en arroz donde se demostró mejores resultados; para la capacidad enzimática, se observaron diferentes respuestas, dependiendo de la enzima con la cual se trabajaba. La capacidad insecticida fue evaluada en un bioensayo que reportó a las esporas obtenidas de avena como efectivas a concentraciones menores, ya que eliminaron al 50 % de la población de P. xylostella, valores analizados mediante LD50. Este estudio indica que, al seleccionar un sustrato para la reproducción de B. bassiana se deben tomar en cuenta diferentes criterios como es la capacidad de germinación que tiene cada una de las esporas en los sustratos de donde provienen su capacidad insecticida y el costo de producción. Sin embargo, la experimentación en campo es necesaria para confirmar los datos reportados a nivel de laboratorio e invernadero.